24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2906  |  回复: 7

迷情八月

金虫 (正式写手)

[交流] western-blot实验结果,大家帮忙分析下 已有4人参与

我最近在做一个关于纯化抗体的课题,抗原E-coli表达后,自己纯化的 ,跑胶的时候,发现比较纯,只有一条目的蛋白的主带。然后免疫小鼠 筛选杂交瘤细胞,抗体纯化后,用western检测抗体的纯度,实验结果如下图,上样孔分别是:Maker(自己做的,没预染,所以看不到);阴性对照,Ecoli(1:10稀释)空菌;阴性对照,Ecoli(1:100稀释)裂解液;目的蛋白(1:10)稀释;目的蛋白(1:100)稀释;目的蛋白(1:500)稀释。目的大小23KD。
        实验结果,阴性对照孔两个基本上没有颜色,可以断定我们的抗体和细菌蛋白是没有交叉反应的;目的蛋白均能染出颜色,但令人纠结的是,为什么1:10稀释的目的蛋白(颜色最亮的那条)上方会多出一条带(对了一下maker,大约50左右)?
       这个实验结果是否能说明,我得到的抗体是纯的?求大神指点


[ Last edited by 迷情八月 on 2012-3-17 at 14:27 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)

自己先顶一下
2楼2012-03-17 14:28:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcppp1974

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我估计会不会是你目标蛋白的二聚体?因为目标蛋白的MW=23 kDa,  23 x 2 = 46 kDa.在电泳水平上,46和50 kDa是很难区分的。更何况50 kDa你也是估计的。因此建议你加入ME或DTT(切断双硫键)后再试一次,如果是-SS-键,那你加入还原剂后就会变成一条带。希望该休息对你有用。
3楼2012-03-17 15:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是杂带的话,是不是你一抗浓度太大了,稀释下试试
4楼2012-03-17 21:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lcppp1974 at 2012-03-17 15:46:02:
我估计会不会是你目标蛋白的二聚体?因为目标蛋白的MW=23 kDa,  23 x 2 = 46 kDa.在电泳水平上,46和50 kDa是很难区分的。更何况50 kDa你也是估计的。因此建议你加入ME或DTT(切断双硫键)后再试一次,如果是-SS- ...

我上的是还原的buffer,我们自己也认为可能是形成二聚体了,会不会是二聚体的浓度太高了,DTT还来不及还原?
5楼2012-03-19 08:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcppp1974

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白样品中你最好用DTT,它能较稳定地把SS还原为SH,且要加大浓度,因为我推测你的目标蛋白中的SH很容易形成SS,因此要加过量的DTT。

还有,也许你的还原时间不够。还原条件:沸水,5min。常温,>5h.

仅供参考。
6楼2012-03-19 13:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们一般是加过量的DTT来还原的,而且1沸水浴10min
其实越简单的生活越幸福
7楼2012-04-10 20:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

日子妞儿

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
有些蛋白出现扎带也是很正常的  多余的位置会有
我是黑妞儿 哈哈
8楼2014-11-14 14:23:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 迷情八月 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +7 瓶子PZ 2026-03-31 7/350 2026-04-05 17:49 by liucky
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 材料与化工363求推荐 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:11 by 陌秋26
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 331求调剂 +3 niby 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:56 by 蓝云思雨
[考研] 材料295 +13 小英11 2026-04-03 14/700 2026-04-04 09:02 by 来看流星雨10
[考研] 化工调剂303分,过四级 +28 栖梧待风 2026-04-02 28/1400 2026-04-03 21:40 by qlm5820
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:06 by arrow8852
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业(专硕)300分可以调剂去哪 +8 10160315 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:36 by hypershenger
[考研] 282求调剂 +13 呼吸都是减肥 2026-04-01 13/650 2026-04-02 14:10 by baoball
[考研] 求调剂推荐 +3 南山南@ 2026-04-01 3/150 2026-04-02 12:09 by xiaoranmu
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
信息提示
请填处理意见