应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 模板浓度高会影响反转录结果吗?
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2929  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

koko1210

铜虫 (正式写手)

[交流] 模板浓度高会影响反转录结果吗?

我用同一种的模板，做了两次反转录，第一次加10微升模板，40微升反转录体系；第二次加15微升模板，同样试剂盒，40微升反转录体系。然而第二次反转录出来的cDNA浓度比第一次还要低，很奇怪。
我知道模板浓度高会影响反转录效率，但是怎么还会降低cDNA的浓度？我总认为如果模板浓度过高，反转不下去，也就达到40微升体系中CDNA的最大浓度，不知这个想法是否是错误的？请各位多指教```
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

西瓜

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-14 19:55:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
koko1210(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
wanhscn(金币+8, MolEPI+1): very good! 授予专家指数！辛苦！ 2012-03-15 00:01:26
加模板不是要看体积，要看RNA的量哦。反转录试剂盒上会有关于RNA模板用量的说明，可参考下。不知道你用了多少RNA，所以不好说。RNA过量至少带来2个问题：
1.反转录酶能力有限，RNA过量会造成反转录不完全，就是说有的RNA没能反转录成cDNA。如果用来定量，结果就会不准确。
2.提取RNA的过程中使用的试剂会影响酶活性，所以体积不能加太多，一般不要超过反转录体系的1/10（具体请参考试剂盒说明书）。

另外，测cDNA浓度是很奢侈的行为。反转录酶那么贵，cDNA是很珍贵的，不要浪费。一般的做法是测RNA浓度，然后不同样品都使用同样量的RNA去做反转录，这样得到的不同样品的cDNA就可以认为浓度是一样的。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

koko1210
2楼2012-03-14 22:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koko1210

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-14 22:28:20:
加模板不是要看体积，要看RNA的量哦。反转录试剂盒上会有关于RNA模板用量的说明，可参考下。不知道你用了多少RNA，所以不好说。RNA过量至少带来2个问题：
1.反转录酶能力有限，RNA过量会造成反转录不完全，就是说 ...

明白了，非常感谢！
回复此楼
3楼2012-03-15 17:57:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华晔-123

铜虫 (初入文坛)
★
koko1210(金币+1): 谢谢参与
模板浓度确实会影响反转录的效率，而且一般试剂盒说明上也会表明RNA不超过的量，一般不超过1ug....
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-22 13:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
icerivers4楼
2012-03-15 18:03   回复  
koko1210(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 koko1210 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +16 不逢春 2026-04-07 17/850 2026-04-08 00:22 by T可可西里T
[考研] 266求调剂 +9 阳阳哇塞 2026-04-07 9/450 2026-04-07 22:43 by 来看流星雨10
[考研] 化工求调剂！ +24 RichLi_ 2026-04-06 24/1200 2026-04-07 17:17 by 蓝云思雨
[考研] 283分求调剂 +13 试试看呗 2026-04-04 13/650 2026-04-07 17:11 by 一只xx浩
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 085600，321分求调剂 +14 大馋小子 2026-04-04 15/750 2026-04-06 22:58 by qlm5820
[考研] 318求调剂 +12 ykyhsa 2026-04-05 14/700 2026-04-06 17:46 by fuyu_
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 321求调剂 +6 认真求上学 2026-04-03 6/300 2026-04-04 19:51 by dongzh2009
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +4 zhouzhen654 2026-04-03 4/200 2026-04-04 18:10 by 猪会飞
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 285求调剂 +5 AZMK 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by AZMK
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:06 by arrow8852
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 一志愿武汉理工0856，初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突，
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 310分求调剂 +4 成功上岸wang 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:35 by liu823948201
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭