模板浓度高会影响反转录结果吗? - 分子生物 - 综合其他

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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

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koko1210(金币+1): 谢谢参与

送鲜花一朵
wanhscn(金币+8, MolEPI+1): very good! 授予专家指数！辛苦！ 2012-03-15 00:01:26

加模板不是要看体积，要看RNA的量哦。反转录试剂盒上会有关于RNA模板用量的说明，可参考下。不知道你用了多少RNA，所以不好说。RNA过量至少带来2个问题：
1.反转录酶能力有限，RNA过量会造成反转录不完全，就是说有的RNA没能反转录成cDNA。如果用来定量，结果就会不准确。
2.提取RNA的过程中使用的试剂会影响酶活性，所以体积不能加太多，一般不要超过反转录体系的1/10（具体请参考试剂盒说明书）。

另外，测cDNA浓度是很奢侈的行为。反转录酶那么贵，cDNA是很珍贵的，不要浪费。一般的做法是测RNA浓度，然后不同样品都使用同样量的RNA去做反转录，这样得到的不同样品的cDNA就可以认为浓度是一样的。