| 查看: 2908 | 回复: 4 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
模板浓度高会影响反转录结果吗?
|
||||
|
我用同一种的模板，做了两次反转录，第一次加10微升模板，40微升反转录体系；第二次加15微升模板，同样试剂盒，40微升反转录体系。然而第二次反转录出来的cDNA浓度比第一次还要低，很奇怪。 我知道模板浓度高会影响反转录效率，但是怎么还会降低cDNA的浓度？我总认为如果模板浓度过高，反转不下去，也就达到40微升体系中CDNA的最大浓度，不知这个想法是否是错误的？请各位多指教``` |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有299人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 反转录高手进来~~
已经有8人回复
- RNA浓度只有几十ng/ul，不知道可不可以反转录做RT（在线急等）
已经有12人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 求助，PCR的电泳结果出了未知问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录
已经有16人回复
- 【求助/交流】5'Race反复做不出来，该怎么办
已经有74人回复
- 【求助/交流】RT-PCR不成功
已经有25人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
物理学 调剂
+1/86
-
双一流南京医科大学招计算机、AI、统计、生物信息等方向26年9月入学博士
+1/86
-
物理学 调剂
+1/80
-
西北大学化学与材料科学学院博士招生（还有两个名额，3月30日截至）
+1/66
-
光学工程学硕调剂信息
+2/44
-
华南师范大学（211）博士招生- 电子、自动化、机械、生物学、物理相关专业
+2/42
-
西安某大学能源化工新材料研发项目组接收2026级调剂研究生-计算机类
+1/40
-
江西赣州-赣南师范大学-学校推荐
+1/11
-
新加坡国立大学药学系化学生物学课题组招PhD
+1/8
-
南京理工大学招收2026级硕士生-张光普博导
+2/8
-
26年申博自荐-计算机视觉
+1/7
-
招收调剂生 国家重点实验室（广西某师范大学、B区）
+1/7
-
华中科技大学管理学院招聘社会用工（科研助理）1名
+1/6
-
温州医科大学招收特种医学博士研究生1名（专业不限，有实验基础）
+1/6
-
欢迎加入赣南师范大学先进光电子研究中心
+1/5
-
东北林业大学（211，双一流）宋老师课题组招收高分子、化学、复合材料等方向研究生
+1/4
-
重庆大学长江学者团队诚聘储能方向博士后
+1/3
-
125603工业工程与管理调剂
+1/2
-
巴塞罗那自治大学（UAB）-巴塞罗那材料研究所（ICMAB）招收博士研究生
+1/2
-
中国科学院地球化学研究所招科研助理
+1/1
5楼2012-03-22 13:31:23
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
koko1210(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
wanhscn(金币+8, MolEPI+1): very good! 授予专家指数！辛苦！ 2012-03-15 00:01:26
koko1210(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵wanhscn(金币+8, MolEPI+1): very good! 授予专家指数！辛苦！ 2012-03-15 00:01:26
|
加模板不是要看体积，要看RNA的量哦。反转录试剂盒上会有关于RNA模板用量的说明，可参考下。不知道你用了多少RNA，所以不好说。RNA过量至少带来2个问题： 1.反转录酶能力有限，RNA过量会造成反转录不完全，就是说有的RNA没能反转录成cDNA。如果用来定量，结果就会不准确。 2.提取RNA的过程中使用的试剂会影响酶活性，所以体积不能加太多，一般不要超过反转录体系的1/10（具体请参考试剂盒说明书）。 另外，测cDNA浓度是很奢侈的行为。反转录酶那么贵，cDNA是很珍贵的，不要浪费。一般的做法是测RNA浓度，然后不同样品都使用同样量的RNA去做反转录，这样得到的不同样品的cDNA就可以认为浓度是一样的。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2012-03-14 22:28:20
3楼2012-03-15 17:57:05
