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865310007

木虫 (小有名气)

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[交流] 内切酶和连接酶buffer的选择

体系中需要加入连接酶和内切酶，那buffer怎么办呢？两个buffer成分差不多，如果10微升体系，那buffer是各加1微升10*的，还是加一个就可以了呢？更或者说，每个都加0.5微升？？？
如果两个buffer都加的话，那溶液中盐离子浓度会不会太高了呢？会不会影响酶的活性？

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1楼 2012-03-11 21:59:31

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susizheng

木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

8楼: Originally posted by 865310007 at 2012-03-12 21:29:04:
buffer可以共用吗？我看文献里面两个酶是同时加的，而且只加了连接酶的buffer，没有加内切酶的buffer，但是我就做不出来，现在考虑buffer的问题，两个buffer共用不会使溶液中盐离子浓度升高吗？不会影响酶的活性吗?

我们做连接的时候，载体酶切一般都不回收，直接将载体酶切体系加酶切回收片段连接，加连接酶加ATP，不再加连接酶的buffer，因为离子浓度太高对酶活影响较大。