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865310007

木虫 (小有名气)

[求助] DNA连接酶和内切酶的选用

现在用限制性内切酶切割DNA双链,用的是Hha I 和Hpa II,再加连接酶,用的是Amp连接酶和Taq连接酶
这样的话,连接酶会不会把切开的双链又链接上了呢?
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天天开心
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
865310007(金币+2): 2012-03-11 22:08:57
连接酶一般需要ATP提供能量吧,Amp连接酶和Taq连接酶,我没用过。酶切时计算两种限制性内切酶的酶量可以利用在线软件进行,而且可以推荐最优buffer,不用再四处查阅各种公司的目录
http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php
用户名和密码都是test,可以试试
2楼2012-02-21 22:58:07
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865310007

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2012-02-21 22:58:07:
连接酶一般需要ATP提供能量吧,Amp连接酶和Taq连接酶,我没用过。酶切时计算两种限制性内切酶的酶量可以利用在线软件进行,而且可以推荐最优buffer,不用再四处查阅各种公司的目录
[url]http://www.bioinfomatic ...

谢谢了,可是我想知道连接酶会不会把切开的DNA链再连接上吗?Amp连接酶和Taq连接酶都不需要ATP的,T4 DNA连接酶才需要ATP呢
天天开心
3楼2012-02-22 18:25:59
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果是同时酶切和连接反应,当然会再连接上
4楼2012-02-22 22:06:03
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865310007

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2012-02-22 22:06:03:
如果是同时酶切和连接反应,当然会再连接上

可是我不希望切开的DNA再链上啊,这样可能吗?怎么操作?
天天开心
5楼2012-02-23 14:59:42
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