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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA连接酶和内切酶的选用
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865310007

木虫 (小有名气)

[求助] DNA连接酶和内切酶的选用

现在用限制性内切酶切割DNA双链，用的是Hha I 和Hpa II，再加连接酶，用的是Amp连接酶和Taq连接酶
这样的话，连接酶会不会把切开的双链又链接上了呢？
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天天开心
1楼 2012-02-21 21:37:33
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
865310007(金币+2): 2012-03-11 22:08:57
连接酶一般需要ATP提供能量吧，Amp连接酶和Taq连接酶，我没用过。酶切时计算两种限制性内切酶的酶量可以利用在线软件进行，而且可以推荐最优buffer，不用再四处查阅各种公司的目录
http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php
用户名和密码都是test,可以试试
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2楼2012-02-21 22:58:07
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865310007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by panda73 at 2012-02-21 22:58:07:
连接酶一般需要ATP提供能量吧，Amp连接酶和Taq连接酶，我没用过。酶切时计算两种限制性内切酶的酶量可以利用在线软件进行，而且可以推荐最优buffer，不用再四处查阅各种公司的目录
[url]http://www.bioinfomatic ...

谢谢了，可是我想知道连接酶会不会把切开的DNA链再连接上吗？Amp连接酶和Taq连接酶都不需要ATP的，T4 DNA连接酶才需要ATP呢
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天天开心
3楼2012-02-22 18:25:59
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果是同时酶切和连接反应，当然会再连接上
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4楼2012-02-22 22:06:03
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865310007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by panda73 at 2012-02-22 22:06:03:
如果是同时酶切和连接反应，当然会再连接上

可是我不希望切开的DNA再链上啊，这样可能吗？怎么操作？
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天天开心
5楼2012-02-23 14:59:42
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