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865310007

木虫 (小有名气)


[交流] 内切酶和连接酶buffer的选择

体系中需要加入连接酶和内切酶,那buffer怎么办呢?两个buffer成分差不多,如果10微升体系,那buffer是各加1微升10*的,还是加一个就可以了呢?更或者说,每个都加0.5微升???
如果两个buffer都加的话,那溶液中盐离子浓度会不会太高了呢?会不会影响酶的活性?
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jting0912

新虫 (初入文坛)



865310007(金币+1): 谢谢参与
应该先各自进行酶切,验证酶切成功后再连接吧~~~~~~~~~~~~~
3楼2012-03-12 11:08:47
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查看全部 11 个回答

j2

木虫 (正式写手)



865310007(金币+1): 谢谢参与
又连接又切???孤陋寡闻了,这是什么情况?
2楼2012-03-12 10:21:11
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865310007(金币+1): 谢谢参与
内切酶切完后,体系灭活,再用加连接酶连接吧,buffer可以共用,但是加连接酶时要额外加ATP提供能量。
4楼2012-03-12 11:17:55
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dorecnu

木虫 (正式写手)



865310007(金币+1): 谢谢参与
请楼主先解释一下,您的实验目的是什么?为什么不酶切后回收片段,然后再连接。在避免了buffer不同的同时每一步都可以检测,便于后面设置连接反应。
5楼2012-03-12 12:01:10
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