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遥望87

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增结果

最近在扩增某基因的中间片段,刚开始时PCR结果经电泳检测有条带,后来在相同的条件下(PCR反应条件、cDNA及所用的试剂均一样)却怎么也扩不出来了,是引物的问题吗?(引物为简并引物,另外cDNA已用内参检验过,没有问题)。该问题已困扰鄙人很久了,望高手指点。非常感谢!
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夜空中最亮的星!
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boqikang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励新虫!欢迎常来啊! 2012-03-09 23:47:20
我也遇到过此问题。最后我用PCR产物再一次PCR了一次,最后有了条带。我感觉是不是dna浓度太小了,或是DNA浓度不均匀。你看看吧
5楼2012-03-09 12:27:23
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 设置正确的对照很重要! 2012-03-09 23:46:56
遥望87(金币+3): 有帮助 谢谢! 2012-03-11 10:12:24
建议你将内参的扩增和目的基因片度的扩增同时进行,设置阴性和阳性对照是发现问题的最好办法
2楼2012-03-09 07:59:48
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szylnl

银虫 (小有名气)

是不是cDNA时间长了啊
用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-03-09 08:57:42
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遥望87

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by szylnl at 2012-03-09 08:57:42:
是不是cDNA时间长了啊

不会吧,中间也就只隔两三天,而且cDNA一直都放在-40的冰箱里的
夜空中最亮的星!
4楼2012-03-09 10:29:59
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