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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » PCR扩增结果
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遥望87

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增结果

最近在扩增某基因的中间片段，刚开始时PCR结果经电泳检测有条带，后来在相同的条件下（PCR反应条件、cDNA及所用的试剂均一样）却怎么也扩不出来了，是引物的问题吗？（引物为简并引物，另外cDNA已用内参检验过，没有问题）。该问题已困扰鄙人很久了，望高手指点。非常感谢！
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夜空中最亮的星！
1楼 2012-03-08 21:32:18
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 设置正确的对照很重要！ 2012-03-09 23:46:56
遥望87(金币+3): ★有帮助 谢谢！ 2012-03-11 10:12:24
建议你将内参的扩增和目的基因片度的扩增同时进行，设置阴性和阳性对照是发现问题的最好办法
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2楼2012-03-09 07:59:48
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szylnl

银虫 (小有名气)
是不是cDNA时间长了啊
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用百分之百的努力去做每件事
3楼2012-03-09 08:57:42
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遥望87

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by szylnl at 2012-03-09 08:57:42:
是不是cDNA时间长了啊

不会吧，中间也就只隔两三天，而且cDNA一直都放在-40的冰箱里的
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夜空中最亮的星！
4楼2012-03-09 10:29:59
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boqikang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励新虫！欢迎常来啊！ 2012-03-09 23:47:20
我也遇到过此问题。最后我用PCR产物再一次PCR了一次，最后有了条带。我感觉是不是dna浓度太小了，或是DNA浓度不均匀。你看看吧
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5楼2012-03-09 12:27:23
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Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
遥望87(金币+1): ★有帮助 应该没有，谢谢！ 2012-03-11 10:13:23
DNA跟引物的浓度有问题没得
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6楼2012-03-09 12:44:24
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yaoyaozhd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
遥望87(金币+2): ★有帮助 谢谢！ 2012-03-11 10:12:56
确定一下所用的试剂、模板、引物有没有问题吧；也可以换别的温度试试，别在一棵树上吊死
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7楼2012-03-09 21:43:28
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yiyi12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励应助！ 2012-03-11 16:17:38
是不是cDNA浓度不匀？用之前搅匀再吸取呢？还有简并引物是不是反复冻融次数太多了？
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8楼2012-03-10 17:18:52
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遥望87

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by boqikang at 2012-03-09 12:27:23:
我也遇到过此问题。最后我用PCR产物再一次PCR了一次，最后有了条带。我感觉是不是dna浓度太小了，或是DNA浓度不均匀。你看看吧

那你后来跑出的条带是你的目的条带吗？
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夜空中最亮的星！
9楼2012-03-11 10:12:01
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盛宏霞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我最近也遇到这样的问题，引物刚合成时做了次PCR，都扩增出来目的条带，后来在相同的条件下就是没有目的条带，但是感觉有引物二聚体的产生，如果有高手帮忙解决下吧！
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10楼2012-03-29 09:35:49
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