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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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遥望87: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢! 2012-04-18 16:19:39
cDNA很容易降解的,虽然是放在-40℃,但是冰箱门经常开关的话几天之内也是会有降解,而且反复冻融几次也肯定有降解。最好是在逆转录之后把cDNA分装成几分,常用的那份放在-40℃,其它放在-80℃冻存。你可以再用你的体系检测内参看看是否是cDNA的原因。PCR结果不能重复有很多原因的。比如几次加样时使用枪头不是一批吸附性不同,PCR仪中放置在不同的孔中温度有波动以及升降温时间有差异,同一个公司同一种酶不同批号之间活性会有差异,PCR用水可以直接用双蒸水或者超纯水,灭过菌之后会变酸性等等。可以设计一个方案一一排除。或者为了省时间可以直接一套全换新的。
11楼2012-03-29 10:34:03
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遥望87

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 盛宏霞 at 2012-03-29 09:35:49:
我最近也遇到这样的问题,引物刚合成时做了次PCR,都扩增出来目的条带,后来在相同的条件下就是没有目的条带,但是感觉有引物二聚体的产生,如果有高手帮忙解决下吧!

你加样的时候是混合后再加,还是一个个的加。
夜空中最亮的星!
12楼2012-03-31 16:33:44
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