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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » PCR扩增结果
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
遥望87: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-04-18 16:19:39
cDNA很容易降解的，虽然是放在-40℃，但是冰箱门经常开关的话几天之内也是会有降解，而且反复冻融几次也肯定有降解。最好是在逆转录之后把cDNA分装成几分，常用的那份放在-40℃，其它放在-80℃冻存。你可以再用你的体系检测内参看看是否是cDNA的原因。PCR结果不能重复有很多原因的。比如几次加样时使用枪头不是一批吸附性不同，PCR仪中放置在不同的孔中温度有波动以及升降温时间有差异，同一个公司同一种酶不同批号之间活性会有差异，PCR用水可以直接用双蒸水或者超纯水，灭过菌之后会变酸性等等。可以设计一个方案一一排除。或者为了省时间可以直接一套全换新的。
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11楼2012-03-29 10:34:03
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遥望87

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 盛宏霞 at 2012-03-29 09:35:49:
我最近也遇到这样的问题，引物刚合成时做了次PCR，都扩增出来目的条带，后来在相同的条件下就是没有目的条带，但是感觉有引物二聚体的产生，如果有高手帮忙解决下吧！

你加样的时候是混合后再加，还是一个个的加。
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夜空中最亮的星！
12楼2012-03-31 16:33:44
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