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组氨酸标签重组蛋白纯化
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用GE的1ml HisTrap HP 纯化的，binding buffer （pH7.0 25mM Tris-HCl 0.5MNaCl) 结合后，用250mM咪唑10CV线性洗脱，得到3个洗脱峰，洗脱峰1和2有交集，洗脱峰3单独的一个峰，然后超滤离心管稍微浓缩了一下跑SDS-PAGE。 1、按理说峰3应该是我的目的蛋白，可是检测酶活性峰2活性很高，峰3很微弱的活性，这是怎么回事？我哪里出错了吗？ 2、后来不知道是不是柱子结合效率低了，怎么都跑不出第三个峰，检测只有穿透峰有酶活，洗脱峰没有酶活。 请各位大侠指教.....  lane1：marker lane2：破碎液 lane3：穿透峰 lane4：洗脱峰1 lane5：洗脱峰2 lane6：洗峰脱3 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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wen1023tao
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2楼2012-02-27 13:19:26