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金虫 (正式写手)

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[求助] PCR引物的量如何确定，求助高手指教已有1人参与

最近做PCR发现一个问题，一些资料上说PCR体系中引物的量要稍大于模板的量，可是在PCR过程中引物不断被消耗，我计算了下十几二十几个循环后引物明显不够啊，比如我做的PCR 50ul 体系：引物1、2各为25 pmol ，模板量4 pmol ，我的是倍数扩增，按我的做法不到四个循，引物环就消耗干净了。可是我在实际操作中发现，PCR在第二十五、六个循环才出条带，这是为什么啊。求高人指点

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1楼 2012-02-23 15:37:38

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海阔天空8158

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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小丹木木(金币+3): 呵呵 2012-02-24 10:51:54

这个问题与算法无关。
楼主，你的算法可能没错，但是，你忽略一个重要问题：你的DNA都是你的目的产物吗？肯定有许多其他无关序列的。
因此，计算没有丝毫意义。这也是平常做PCR的时候根本不会计算的原因。

即使能够定量。随着循环数的提高，引物的使用量非常惊人的。另外，只要确实有目的序列，那么使用标准算法没什么问题的。

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