应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 要P一段基因全长，已知CDS，怎么设计引物啊？
111/2返回列表12下一页
查看: 8263  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 要P一段基因全长，已知CDS，怎么设计引物啊？

新手 没用过primer，发现这个软件貌似不能设计全长引物。。。真是恼火~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2012-01-19 21:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
参照楼上。
如果参照楼上设计引物不好用，就只有在CDS中间设计引物，获得序列后再用RACE获得全长。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-01-20 09:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
btx362237729(金币+5): ★★★★★最佳答案 楼上的各位都很好，版主的回答给我极大的信心 非常感谢! 2012-01-21 01:04:01
btx362237729: 回帖置顶 2012-01-21 01:04:08
扩增CDS就只能在CDS两端设计了，可以调整下两端引物长度来改变下Tm值GC含量，但是调整余地不大。
不过不必担心，PCR本身很容易做，仅用于扩增的话对引物要求很低的。你这种情况我们一般也不看软件，直接两端各取18~20bp就ok了。大胆做就是了哈~
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-01-20 12:57:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

鱼山听涛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-20 12:50:48
primer可以自行确定引物位置，把引物拖到CDS两端就可以了，然后看一下有没有二聚体和Tm就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
书到用时方恨少
2楼2012-01-20 09:24:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼山听涛 at 2012-01-20 09:24:48:
primer可以自行确定引物位置，把引物拖到CDS两端就可以了，然后看一下有没有二聚体和Tm就可以了。

同意2楼意见，请楼主再仔细摸索一下软件，可以设计全长引物啊！或者不用软件，你就自己选择一对，拿到软件里看下有没有二聚体、发夹结构什么的，及其Tm。
赞一下 回复此楼
4楼2012-01-20 10:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

7788945

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 鼓励交流~春节快乐哈~ 2012-01-26 12:29:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-01-20 09:32:02:
参照楼上。
如果参照楼上设计引物不好用，就只有在CDS中间设计引物，获得序列后再用RACE获得全长。

已知CDS，就用不着RACE了，成本忒高
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-01-26 12:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bst5

银虫 (小有名气)
可以把你要扩增的序列往两端延长一段，然后把整个序列粘贴到primer5中，限定上下游引物的位置，就可以自动生成了，不同意楼上几位手动设计引物的观点，除非你模板是质粒，要是是cDNA的话，那样会有很多非特异扩增，费时又费力，祝好运！
赞一下 回复此楼
7楼2012-01-31 17:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小沫沫188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bst5 at 2012-01-31 17:11:18
可以把你要扩增的序列往两端延长一段，然后把整个序列粘贴到primer5中，限定上下游引物的位置，就可以自动生成了，不同意楼上几位手动设计引物的观点，除非你模板是质粒，要是是cDNA的话，那样会有很多非特异扩增， ...

请问怎么把序列往两端延长啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-31 16:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卷卷有人用了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-20 12:57:19
扩增CDS就只能在CDS两端设计了，可以调整下两端引物长度来改变下Tm值GC含量，但是调整余地不大。
不过不必担心，PCR本身很容易做，仅用于扩增的话对引物要求很低的。你这种情况我们一般也不看软件，直接两端各取18 ...

你好，请问我做染色体步移克隆启动子，我只能找到目的基因的CDS区，怎么设计引物啊。跪求
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-02 10:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱笑的芳宝8

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 卷卷有人用了 at 2016-03-02 10:25:21
你好，请问我做染色体步移克隆启动子，我只能找到目的基因的CDS区，怎么设计引物啊。跪求...

同求……

发自小木虫Android客户端
回复此楼
10楼2017-02-22 05:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 btx362237729 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低 +10 瞬息宇宙 2026-02-20 13/650 2026-02-23 11:23 by holypower
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 8rmuugja8q 2026-02-22 7/350 2026-02-23 09:44 by w4l55oybr1
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 8/400 2026-02-23 09:29 by w4l55oybr1
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +5 usprnugpzw 2026-02-21 11/550 2026-02-23 09:24 by w4l55oybr1
[教师之家] 为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？ +5 欢乐颂叶蓁 2026-02-21 8/400 2026-02-23 09:19 by 欢乐颂叶蓁
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 w89i99eaeh 2026-02-22 5/250 2026-02-23 08:04 by w4l55oybr1
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 6/300 2026-02-23 07:59 by w4l55oybr1
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +6 3dfhjxgsh7 2026-02-22 9/450 2026-02-23 07:49 by w4l55oybr1
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 4/200 2026-02-23 06:46 by jsjzfl
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 khieu8v8m0 2026-02-22 5/250 2026-02-23 06:29 by w4l55oybr1
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 8/400 2026-02-23 06:24 by w4l55oybr1
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +5 3dfhjxgsh7 2026-02-22 6/300 2026-02-23 02:04 by 5jlh3qtdvx
[教师之家] 版面费该交吗 +7 苹果在哪里 2026-02-22 8/400 2026-02-22 22:37 by otani
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +4 阿拉贡aragon 2026-02-22 4/200 2026-02-22 21:22 by 山西悬空寺空悬�
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 usprnugpzw 2026-02-21 6/300 2026-02-22 19:48 by w89i99eaeh
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 3dfhjxgsh7 2026-02-22 4/200 2026-02-22 16:52 by khieu8v8m0
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 usprnugpzw 2026-02-22 3/150 2026-02-22 16:37 by khieu8v8m0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 usprnugpzw 2026-02-21 4/200 2026-02-22 16:27 by khieu8v8m0
[基金申请] 什么是人一生最重要的？ +4 瞬息宇宙 2026-02-21 4/200 2026-02-22 11:44 by huagongfeihu
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +11 瞬息宇宙 2026-02-16 12/600 2026-02-21 21:14 by lq493392203
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭