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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 要P一段基因全长,已知CDS,怎么设计引物啊?

新手 没用过primer,发现这个软件貌似不能设计全长引物。。。真是恼火~
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bst5

银虫 (小有名气)

可以把你要扩增的序列往两端延长一段,然后把整个序列粘贴到primer5中,限定上下游引物的位置,就可以自动生成了,不同意楼上几位手动设计引物的观点,除非你模板是质粒,要是是cDNA的话,那样会有很多非特异扩增,费时又费力,祝好运!
7楼2012-01-31 17:11:18
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查看全部 11 个回答

鱼山听涛

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-20 12:50:48
primer可以自行确定引物位置,把引物拖到CDS两端就可以了,然后看一下有没有二聚体和Tm就可以了。
书到用时方恨少
2楼2012-01-20 09:24:48
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
参照楼上。
如果参照楼上设计引物不好用,就只有在CDS中间设计引物,获得序列后再用RACE获得全长。
3楼2012-01-20 09:32:02
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鱼山听涛 at 2012-01-20 09:24:48:
primer可以自行确定引物位置,把引物拖到CDS两端就可以了,然后看一下有没有二聚体和Tm就可以了。

同意2楼意见,请楼主再仔细摸索一下软件,可以设计全长引物啊!或者不用软件,你就自己选择一对,拿到软件里看下有没有二聚体、发夹结构什么的,及其Tm。
4楼2012-01-20 10:32:47
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