| 查看: 11023 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
shenxing325铜虫 (小有名气)
|
[求助]
求助，Western-Blot转膜不成功
|
|
|
各位虫友，做了两次Western-Blot转膜都不成功，想各位帮我指点一下可能的原因，这些是我做实验的时候的条件细节： 目的蛋白大小100kD左右，用的是湿转法，电转缓冲液（5×）的配方是： Glycine 15.1g Tris 72g SDS 5g 定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和100mL甲醇，4度备用 滤纸（3mm滤纸用两边各用两层）比膜和胶大比较多，之前看过一些人说滤纸要比膜小，但是好像大多数人都说对于湿转来说没有关系。 膜用的是0.45um的PVDF膜，这个有人说要用0.22um的，是这样吗？ 电转于4度冰柜中进行，80V电压，时间2h，用立春红染色，但是什么都没有，我没有用预染Marker。 看大多数人都说湿转是非常容易成功的，我的实验操作哪里有问题吗？请指教，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有131人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
求助Western-bot转膜问题
已经有25人回复- 关于western blot转膜
已经有20人回复
- 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有35人回复
- 【求助/交流】请教关于western blot转印方法的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】southern blot 转膜
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot的内参总是不齐怎么办
已经有19人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- western blot 半干转膜后，发现条带个别缺失，不知道什么原因，请教各位
已经有1人回复
- 关于western-blot求助，大师帮帮忙。。
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教高人关于WESTERN-BLOT的一些问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】有关western-blot的一些问题
已经有18人回复
- western blot 转膜问题 期待高手解答
已经有10人回复
7楼2012-01-13 13:00:46
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
2楼2012-01-12 21:14:25
山东老杜
木虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2546.6
- 散金: 2308
- 红花: 6
- 帖子: 395
- 在线: 259.1小时
- 虫号: 1088911
- 注册: 2010-09-04
- 专业: 肿瘤免疫
3楼2012-01-12 22:34:14
dnaxxx
至尊木虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 11074.2
- 帖子: 278
- 在线: 351.1小时
- 虫号: 254121
- 注册: 2006-05-27
- 性别: GG
- 专业: 病毒、病毒感染与宿主免疫
4楼2012-01-13 07:25:42