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shenxing325铜虫 (小有名气)
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[求助]
求助，Western-Blot转膜不成功
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各位虫友，做了两次Western-Blot转膜都不成功，想各位帮我指点一下可能的原因，这些是我做实验的时候的条件细节： 目的蛋白大小100kD左右，用的是湿转法，电转缓冲液（5×）的配方是： Glycine 15.1g Tris 72g SDS 5g 定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和100mL甲醇，4度备用 滤纸（3mm滤纸用两边各用两层）比膜和胶大比较多，之前看过一些人说滤纸要比膜小，但是好像大多数人都说对于湿转来说没有关系。 膜用的是0.45um的PVDF膜，这个有人说要用0.22um的，是这样吗？ 电转于4度冰柜中进行，80V电压，时间2h，用立春红染色，但是什么都没有，我没有用预染Marker。 看大多数人都说湿转是非常容易成功的，我的实验操作哪里有问题吗？请指教，谢谢！ |
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