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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因
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ziyan1906

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办？什么原因

RT-PCR重复不同次数，跑出来的条带也会不一样，而且不同浓度梯度出现的条带亮度和ELISA结果并不一致，这是怎么回事呢？？
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1楼2012-01-09 11:16:08
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ziyan1906

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by dxzhaomiao at 2012-01-29 14:08:24:
楼主是做的半定量RT-PCR，还是实时荧光定量PCR？半定量我做过很多次，要想多次重复完全没有变化是比较难的，你需要在较低的循环数（15~18）下先调整模版浓度，还要注意PCR反应液误差，不同的移液器误差，不同的PC ...

PCR反应液误差是什么意思？现在已经降低循环数了，效果好点，还是很谢谢了，呵呵！
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4楼2012-02-12 17:53:07
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liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5): 鼓励交流~春节快乐哈~ 2012-01-26 19:05:02
rt-pcr条件要求非常严格，需要在完全无rna酶的情况下进行，枪头、离心管等器具都要用DEPC水泡过，这样才能有良好的重现性，不知道是不是这个原因。
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2楼2012-01-26 16:35:15
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dxzhaomiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主是做的半定量RT-PCR，还是实时荧光定量PCR？半定量我做过很多次，要想多次重复完全没有变化是比较难的，你需要在较低的循环数（15~18）下先调整模版浓度，还要注意PCR反应液误差，不同的移液器误差，不同的PCR仪误差。如果楼主做的是半定量，注意这些问题应该就可以了。还不行的话，建议做荧光定量
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3楼2012-01-29 14:08:24
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