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ziyan1906

银虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR跑出来的条带没有量效关系怎么办?什么原因

RT-PCR重复不同次数,跑出来的条带也会不一样,而且不同浓度梯度出现的条带亮度和ELISA结果并不一致,这是怎么回事呢??
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dxzhaomiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主是做的半定量RT-PCR,还是实时荧光定量PCR?半定量我做过很多次,要想多次重复完全没有变化是比较难的,你需要在较低的循环数(15~18)下先调整模版浓度,还要注意PCR反应液误差,不同的移液器误差,不同的PCR仪误差。如果楼主做的是半定量,注意这些问题应该就可以了。还不行的话,建议做荧光定量
3楼2012-01-29 14:08:24
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liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+5): 鼓励交流~春节快乐哈~ 2012-01-26 19:05:02
rt-pcr条件要求非常严格,需要在完全无rna酶的情况下进行,枪头、离心管等器具都要用DEPC水泡过,这样才能有良好的重现性,不知道是不是这个原因。
2楼2012-01-26 16:35:15
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ziyan1906

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by dxzhaomiao at 2012-01-29 14:08:24:
楼主是做的半定量RT-PCR,还是实时荧光定量PCR?半定量我做过很多次,要想多次重复完全没有变化是比较难的,你需要在较低的循环数(15~18)下先调整模版浓度,还要注意PCR反应液误差,不同的移液器误差,不同的PC ...

PCR反应液误差是什么意思?现在已经降低循环数了,效果好点,还是很谢谢了,呵呵!
4楼2012-02-12 17:53:07
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