| 查看: 8333 | 回复: 32 | ||||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
[交流]
新提的质粒DNA，关于浓度和纯度虫友们发表一些看法吧
|
||||
|
质粒名称 浓度（ng/μL） A260/280 A260/230 质粒1 24 1.97 1.17 质粒2 47.4 1.93 1.56 质粒3 41.8 1.98 1.50 以上是今天提取的质粒的相关测定指标，请大家据此数据帮忙分析一下！个人感觉数值很不理想！提取的很不成功！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有271人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- 质粒DNA提取成了这样，请大家帮忙分析一下
已经有27人回复
- 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！
已经有15人回复
- 【求助/交流】如何提取不带质粒的细菌总DNA？
已经有7人回复
- 【求助/交流】请问能否从环境样品（不摇菌）中直接提取质粒DNA？
已经有10人回复
- 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于质粒DNA转化中，Ca离子的作用问题.谢谢！
已经有11人回复
- 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR
已经有12人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
天津理工大学晶体镀膜实验室2026年硕士研究生调剂招生
+3/1392
-
淮北师范大学资源与环境硕士研究生调剂名额充足（26人），欢迎调剂。
+2/150
-
欢迎调剂到赣南师范大学智能制造与未来能源学院
+2/64
-
喀什大学环境生态修复功能材料与技术团队接收2026年调剂研究生
+1/42
-
山东理工大学资源与环境工程学院招收调剂考生
+1/24
-
招生物学0710方向硕士调剂
+1/22
-
华南师范大学大分子体系多尺度模拟与实验研究团队招收2026年考研调剂生
+1/20
-
湖南工大李广利教授课题组接受化学、材料、生物、生医、计算机相关专业调剂生8-10名
+1/17
-
湖州师范大学信息工程学院2026年硕士研究生招生调剂公告
+1/16
-
招收地理类、环境类、地化类、生物类、土壤类、农业资源与环境等硕士调剂生
+1/11
-
博士招生 | 青岛科技大学（高分子、化学、材料、力学、航天、机电工程、计算机仿真）
+2/10
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/8
-
长江师范学院化学工程方向接收大量硕士研究生调剂考生
+1/8
-
南方科技大学微电子学院陈鹏教授招收2026级博士生（第二批）
+1/7
-
重庆工商大学 教育部研究中心招收化工/环境/材料/石油/机械方向2026年调剂研究生
+1/7
-
武汉纺织大学全国重点实验室吕永钢教授课题组招收材料、化学、生物相关专业硕士研究生
+1/5
-
济南大学2026年硕士研究生招生预调剂公告
+1/5
-
差旅首选:第一次出差佛山开住宿餐饮发票实体店电子专用,保姆级教程请收好
+1/4
-
调剂招生化学化工（0817、0856）
+1/3
-
[调剂信息] 苏州科技大学化学与生命科学学院招生调剂（不限专业，需要考数学）
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！辛苦！ 2012-01-08 16:58:17
lihengyang86(金币+3): PET42a大小为5930bp，插入片段也就680bp左右。属不属于严紧型质粒倒不是很清楚。多谢您的关注和建议。 2012-01-08 18:15:05
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！辛苦！ 2012-01-08 16:58:17
lihengyang86(金币+3): PET42a大小为5930bp，插入片段也就680bp左右。属不属于严紧型质粒倒不是很清楚。多谢您的关注和建议。 2012-01-08 18:15:05
|
4ml 菌只拿到了不到4ug的质粒～ PET42a 6k? 插入片段多大？整个质粒多大？属于低拷贝不？ 如果属于低拷贝，这个产量也说得过去。 有两种思路： 1）你用同样的操作及kit 提一个正常（高拷贝的质粒）的菌液，看产量是否有问题，如没问题则说明你的菌“有问题”（：本身质粒的拷贝数低问题） 2）如果是本身菌质粒拷贝数低的问题，则另想解决办法：如优化摇菌时间，用营养丰富的培养基，培养提取时的菌液用量或直接中提等等。 |
13楼2012-01-08 16:18:36
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lihengyang86(金币+2): 学习了！多谢！ 2012-01-11 19:39:22
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good！ 2012-01-13 11:43:24
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lihengyang86(金币+2): 学习了！多谢！ 2012-01-11 19:39:22
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good！ 2012-01-13 11:43:24
| 小体系（20ml以下）里是没有关系的，大系A600高了就不行了，这主要与溶氧和营养有关；比如说3ml的体系，比表面积足够大，对LB的营养来说A600达到最大也能满足溶氧需求，但是对于200ml的体系情况就大不一样，即要保证营养，又要保证溶氧，DNA的合成需要消耗大里的能量，质粒扩增也需要压力，上面所有原因的集合，就是前面摸出来的条件，不同的质粒会略有不同，但是不会超出这个范围 |
20楼2012-01-11 18:00:30
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
应用范围来说，主要看你的需要了，如果你要20ug以下，小提的量就足够了，100ug以下，你可以小提多提几个，也很快的，如果不超过200ug或200ug左右，估计一个中提的量也够了，800ug以上，那只有大提了。另外也要看你所需要质粒的质量了，没有特殊要求，普通的试剂盒就可以，如果盐要少，那提的时候就要多洗两次，如果要去内毒素，就要用去内毒素的试剂盒。 影响大提所提质粒的量主要跟菌体培养、所用试剂盒和质粒提取的操方有关；菌体的用量是在试剂盒允许的范围内越多越好，当然了，高考贝质粒的话，可能用一半的菌体量所得的质粒就会超出柱子的承载能力，就没有必要培养那么多菌了；现在很多的试剂盒的说明书都不是最优的操作方法，完全可以大胆的改进 |
30楼2012-04-12 09:46:35
2楼2012-01-08 07:59:19
3楼2012-01-08 08:00:06
5楼2012-01-08 09:46:31
7楼2012-01-08 10:50:58
8楼2012-01-08 10:53:57
9楼2012-01-08 11:23:36
10楼2012-01-08 11:29:18
11楼2012-01-08 13:24:08
12楼2012-01-08 14:22:27
15楼2012-01-08 18:17:43
16楼2012-01-09 10:27:23
17楼2012-01-09 16:56:39
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流。1.78,1.93，这么精确啊 2012-01-09 17:53:45
lihengyang86(金币+2): 那要是这样的话，我提的效率很低了 ！4mL菌液才提了不到4μg！请问你摇菌大概多长时间？！ 2012-01-10 14:49:12
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流。1.78,1.93，这么精确啊 2012-01-09 17:53:45
lihengyang86(金币+2): 那要是这样的话，我提的效率很低了 ！4mL菌液才提了不到4μg！请问你摇菌大概多长时间？！ 2012-01-10 14:49:12
| 康为的试剂盒还是不错的；对于低拷贝数很低的质粒，每ml菌液至少也能提个3到4ug质粒的，对于所提取质粒的质量，A260/A230的值在1.85左右是最好的，低于1.78高于1.93对细胞转化都会有影响，要是酶切或转化大肠的话，可能没有什么影响吧。质粒提取的关键在菌体的培养，一般培养到菌液A600在2.0左右为最好，高于2.5会影响质粒的拷贝数，低于1.5所收的菌量太少。 |
18楼2012-01-09 17:36:13
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 感谢积极交流哦 2012-01-11 08:19:16
lihengyang86(金币+2): 谢谢！我就是小提！另外，想请问为啥提质粒时，不是A值越高越好？！ 2012-01-11 16:19:18
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 感谢积极交流哦 2012-01-11 08:19:16
lihengyang86(金币+2): 谢谢！我就是小提！另外，想请问为啥提质粒时，不是A值越高越好？！ 2012-01-11 16:19:18
|
因为我提的质粒没有超出这个范围的，转化细胞都很好，有同事提的超出了这个范围，出了些意外，但是不能确定是不是质粒的问题，但是没有找到其它原因，所以就都当是这个的原因了。 如果你是小提的话，单菌落接3ml的LB37度过液就没有问题的，如果你是中提或大提的话，种子长到A600 1.2左右，200ml/50ml培养基，接20ul，摇床180rpm，过夜，大概长到1.8左右吧，这样就可以了 |
19楼2012-01-10 23:54:31
21楼2012-01-11 18:38:35
22楼2012-01-12 10:26:44
23楼2012-01-12 11:48:28
24楼2012-01-12 14:00:19
25楼2012-01-12 14:25:59
26楼2012-01-12 14:27:36
浓度偏低，不过酶切可以检测到，回收的话，有点不合适 27楼2012-01-12 15:46:26
28楼2012-01-13 10:49:56
29楼2012-04-11 13:16:36
31楼2012-08-13 16:08:59
32楼2012-10-23 19:28:50
33楼2014-09-28 11:00:32
简单回复
2012-01-08 09:45
回复
祝福
hls859156楼
2012-01-08 10:03
回复
zhengjiuhan14楼
2012-01-08 17:28
回复
