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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新提的质粒DNA，关于浓度和纯度虫友们发表一些看法吧
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longrna

新虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！辛苦！ 2012-01-08 16:58:17
lihengyang86(金币+3): PET42a大小为5930bp，插入片段也就680bp左右。属不属于严紧型质粒倒不是很清楚。多谢您的关注和建议。 2012-01-08 18:15:05
4ml 菌只拿到了不到4ug的质粒～
PET42a  6k? 插入片段多大？整个质粒多大？属于低拷贝不？
如果属于低拷贝，这个产量也说得过去。

有两种思路：
1）你用同样的操作及kit 提一个正常（高拷贝的质粒）的菌液，看产量是否有问题，如没问题则说明你的菌“有问题”（：本身质粒的拷贝数低问题）
2）如果是本身菌质粒拷贝数低的问题，则另想解决办法：如优化摇菌时间，用营养丰富的培养基，培养提取时的菌液用量或直接中提等等。
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13楼2012-01-08 16:18:36
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lihengyang86(金币+2): 学习了！多谢！ 2012-01-11 19:39:22
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good！ 2012-01-13 11:43:24
小体系（20ml以下）里是没有关系的，大系A600高了就不行了，这主要与溶氧和营养有关；比如说3ml的体系，比表面积足够大，对LB的营养来说A600达到最大也能满足溶氧需求，但是对于200ml的体系情况就大不一样，即要保证营养，又要保证溶氧，DNA的合成需要消耗大里的能量，质粒扩增也需要压力，上面所有原因的集合，就是前面摸出来的条件，不同的质粒会略有不同，但是不会超出这个范围
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20楼2012-01-11 18:00:30
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