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longrna

新虫 (正式写手)


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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!辛苦! 2012-01-08 16:58:17
lihengyang86(金币+3): PET42a大小为5930bp,插入片段也就680bp左右。属不属于严紧型质粒倒不是很清楚。多谢您的关注和建议。 2012-01-08 18:15:05
4ml 菌只拿到了不到4ug的质粒~
PET42a  6k? 插入片段多大?整个质粒多大?属于低拷贝不?
如果属于低拷贝,这个产量也说得过去。

有两种思路:
1)你用同样的操作及kit 提一个正常(高拷贝的质粒)的菌液,看产量是否有问题,如没问题则说明你的菌“有问题”(:本身质粒的拷贝数低问题)
2)如果是本身菌质粒拷贝数低的问题,则另想解决办法:如优化摇菌时间,用营养丰富的培养基,培养提取时的菌液用量或直接中提等等。
13楼2012-01-08 16:18:36
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)


★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lihengyang86(金币+2): 学习了!多谢! 2012-01-11 19:39:22
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good! 2012-01-13 11:43:24
小体系(20ml以下)里是没有关系的,大系A600高了就不行了,这主要与溶氧和营养有关;比如说3ml的体系,比表面积足够大,对LB的营养来说A600达到最大也能满足溶氧需求,但是对于200ml的体系情况就大不一样,即要保证营养,又要保证溶氧,DNA的合成需要消耗大里的能量,质粒扩增也需要压力,上面所有原因的集合,就是前面摸出来的条件,不同的质粒会略有不同,但是不会超出这个范围
20楼2012-01-11 18:00:30
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