24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 444  |  回复: 2

churchill87426

木虫 (正式写手)

[求助] 酶切验证突变,但每个样品都有突变?!求助,求方法。

小弟发现一个突变位点,是TC突变。现在收集了些病人的样本。准备验证突变发生的概率。选择的是PCR产物酶切的方法。
我将样品提取基因组后(Takara试剂盒从血液提,或组织切片提取),PCR目的条带200bp胶回收,然后用识别突变位点的内切酶(HpyCH4IV,NEB,识别位点ACGT)酶切。结果发现每个样品都能切开,也就是每个样品都有突变。这个不太可能吧?!并且连正常人的样本都有突变的存在!求助!!!有可能是酶的非特异切割么?

或者有其他较低成本,较可靠的检测突变的方法么?我们准备先做50-100个样品。

因本人是做药筛的,突变只是偶然发现,还请多多指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

问题表述不清楚,你至少得告诉大家突变前是什么序列,突变后是什么序列,以及周边序列,你的实现设计,实验结果等
2楼2012-01-05 11:34:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)

正常的基因序列是XXXACGCXXXX,突变形式是XXXACGTXXX,因实验保密性,故不能把全序列写上。
我PCR 目的片段189bp,包含上述突变位点,PCR后切胶回收,并用HpyCH4IV酶切(酶切A'CG'T),然后跑15%PAGE胶,银染。理论上,若存在突变,跑胶后则会有124bp和65bp两个片段;若无突变,则只有189bp。但酶切了30+个样品,都是2个条带,which means都有突变!包括正常人的样品也有突变,感觉比较奇怪。有可能是酶的非特异切割么?

或者有其他较低成本,较可靠的检测突变的方法么?
3楼2012-01-05 13:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 churchill87426 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +6 Naiko 2026-04-04 6/300 2026-04-05 05:16 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +7 luoziheng 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:17 by lqwchd
[考研] 085400电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +5 星星不眨眼喽 2026-04-03 6/300 2026-04-04 21:50 by hemengdong
[考研] 一志愿华南师范361分,化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 一志愿C9的化学工程(085602) 340分,感觉校内调剂无望,求调剂 +9 万事宜臻 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:49 by 啵啵啵0119
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 266求调剂 +18 阳阳哇塞 2026-04-01 18/900 2026-04-03 18:38 by zllcz
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 一志愿武汉理工0856,初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
[考研] 346求调剂 +5 郑诚乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 16:38 by SZW_UJN
[考研] 一志愿厦门大学化学工程(专硕)-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 求调剂,一志愿北林食品与营养095500,301分,已过六级,有科研经历 +4 快乐储蓄罐 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
[考研] 083000环境科学与工程调剂,总分281 +4 橙子(胜意) 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
信息提示
请填处理意见