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churchill87426木虫 (正式写手)
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[求助]
酶切验证突变，但每个样品都有突变？！求助，求方法。
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小弟发现一个突变位点，是TC突变。现在收集了些病人的样本。准备验证突变发生的概率。选择的是PCR产物酶切的方法。 我将样品提取基因组后（Takara试剂盒从血液提，或组织切片提取），PCR目的条带200bp胶回收，然后用识别突变位点的内切酶（HpyCH4IV，NEB，识别位点ACGT）酶切。结果发现每个样品都能切开，也就是每个样品都有突变。这个不太可能吧？！并且连正常人的样本都有突变的存在！求助！！！有可能是酶的非特异切割么？ 或者有其他较低成本，较可靠的检测突变的方法么？我们准备先做50-100个样品。 因本人是做药筛的，突变只是偶然发现，还请多多指教。 |
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