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妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量扩增曲线与融解曲线分析

刚开始做荧光定量，有关扩增曲线和溶解曲线的问题想要请教高手?扩增曲线如图1：为什么在刚出现平台期后2、3个循环又有上升，这种情况应该怎么改善PCR体系或条件？
溶解曲线如图2：融解温度从55度到95度，55到退火温度87度间不平整的微小峰值是什么意思，这样的曲线能用吗，还是引物仍有问题？

图1 扩增曲线



图2 融解曲线



融解曲线
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1楼2011-12-26 11:44:22
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 感谢应助！ 2011-12-27 16:17:58
有二次扩增，以前有遇过，可能两个方面的原因吧，引物特异性不够，就是可能有错配或者什么的，还有一个原因就是你的体系不行，酶系统不给力，换个别的酶和reaction buffer可能会有改变，根本上还是要改变引物，不然这样的曲线太难看了
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9楼2011-12-27 11:41:51
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妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)
有没有高手在线，帮忙分析下？？
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2楼2011-12-26 11:49:22
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-26 18:06:38
LZ放心吧，你的定量引物没有任何问题，做出来的图也很漂亮，放到论文上是不会有任何问题的。
从融解曲线来看的话，你得扩增产物是单一的（在主峰之前的亚峰不影响结果），如果LZ还不放心的话建议LZ可以讲扩增产物跑个琼脂糖电泳
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妙赞爆米花
3楼2011-12-26 13:43:20
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zhujiumei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
或许存在蒸发，引物感觉也不是特别好。
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妙赞爆米花
4楼2011-12-26 20:41:06
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