应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量扩增曲线与融解曲线分析
61/1返回列表
查看: 4043  |  回复: 9
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量扩增曲线与融解曲线分析

刚开始做荧光定量，有关扩增曲线和溶解曲线的问题想要请教高手?扩增曲线如图1：为什么在刚出现平台期后2、3个循环又有上升，这种情况应该怎么改善PCR体系或条件？
溶解曲线如图2：融解温度从55度到95度，55到退火温度87度间不平整的微小峰值是什么意思，这样的曲线能用吗，还是引物仍有问题？

图1 扩增曲线



图2 融解曲线



融解曲线
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2011-12-26 11:44:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)
有没有高手在线，帮忙分析下？？
赞一下 回复此楼
2楼2011-12-26 11:49:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by yuandian114 at 2011-12-26 13:43:20:
LZ放心吧，你的定量引物没有任何问题，做出来的图也很漂亮，放到论文上是不会有任何问题的。
从融解曲线来看的话，你得扩增产物是单一的（在主峰之前的亚峰不影响结果），如果LZ还不放心的话建议LZ可以讲扩增产物 ...

呵呵，谢谢帮忙解答！
还是想请教下，扩增曲线是怎么回事，为什么平台期后又有上升啊，我还需要再怎么改善PCR体系或条件？可以帮忙分析下吗？
赞一下 回复此楼
5楼2011-12-26 22:56:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by zhujiumei at 2011-12-26 20:41:06:
或许存在蒸发，引物感觉也不是特别好。

非常感谢回复，呵呵
赞一下 回复此楼
6楼2011-12-26 23:12:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
妙赞爆米花: 回帖置顶 2011-12-27 19:51:00
引用回帖:
楼: Originally posted by haiven at 2011-12-27 08:22:39:
从个人实际经验来讲，你的结果应该是没有问题的，可以放心使用。引物的扩增效率、特异性和模板的量都是合适的，Ct值也在合适的范围。重复性也很好。只是你为什么只做两个重复呢？原则上应该至少是三个重复呢？

呵呵，谢谢回复
是做了3次重复，但有一个样可能是加样的时候出问题了，曲线不太好，我就给剔出去了。
我想请教下，我的扩增曲线属正常吗，为什么平台期后会又有上升呢，能帮忙分析下原因吗？
赞一下 回复此楼
8楼2011-12-27 09:19:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 妙赞爆米花 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭