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妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量扩增曲线与融解曲线分析

刚开始做荧光定量,有关扩增曲线和溶解曲线的问题想要请教高手?扩增曲线如图1:为什么在刚出现平台期后2、3个循环又有上升,这种情况应该怎么改善PCR体系或条件?
溶解曲线如图2:融解温度从55度到95度,55到退火温度87度间不平整的微小峰值是什么意思,这样的曲线能用吗,还是引物仍有问题?

图1 扩增曲线



图2 融解曲线



融解曲线
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妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
妙赞爆米花: 回帖置顶 2011-12-27 19:51:00
引用回帖:
: Originally posted by haiven at 2011-12-27 08:22:39:
从个人实际经验来讲,你的结果应该是没有问题的,可以放心使用。引物的扩增效率、特异性和模板的量都是合适的,Ct值也在合适的范围。重复性也很好。只是你为什么只做两个重复呢?原则上应该至少是三个重复呢?

呵呵,谢谢回复
是做了3次重复,但有一个样可能是加样的时候出问题了,曲线不太好,我就给剔出去了。
我想请教下,我的扩增曲线属正常吗,为什么平台期后会又有上升呢,能帮忙分析下原因吗?
8楼2011-12-27 09:19:47
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妙赞爆米花

新虫 (初入文坛)

有没有高手在线,帮忙分析下??
2楼2011-12-26 11:49:22
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yuandian114

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助! 2011-12-26 18:06:38
LZ放心吧,你的定量引物没有任何问题,做出来的图也很漂亮,放到论文上是不会有任何问题的。
从融解曲线来看的话,你得扩增产物是单一的(在主峰之前的亚峰不影响结果),如果LZ还不放心的话建议LZ可以讲扩增产物跑个琼脂糖电泳

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2011-12-26 13:43:20
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zhujiumei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
或许存在蒸发,引物感觉也不是特别好。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2011-12-26 20:41:06
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