| 查看: 3143 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
大家帮忙分析下双向电泳结果不好的原因（有图）
|
|||
|
裂解液配方是：7M尿素，2M硫尿，4%CHAPS，0.3% Bio-lyte，65 mM DTT，加入了罗氏蛋白酶抑制剂。大鼠肝脏在液氮中研磨，大约0.1 g肝脏加入了1ML裂解液，然后冰浴超声了1分钟（就是放进去超声零点几秒然后拿出1秒，再放进去，搞了1分钟）。冰上裂解1h后，35000 g离心 90 min（这个转速已经是我们实验的极限了）。吸取上清做后续实验。 测定了蛋白浓度大概为20mg/ml，水化时吸取了100ul 加入400ul 水化缓冲液（水化缓冲液配方和裂解液一致），上样450ul进行水化，我做的是24cm的胶条，ph 3-10。我做了三根胶条，2根在水化缓冲液家了DTT，第三根加了 TBP（据说TBP可以很好的解决碱性端横纹的问题）。水化了大概14h，然后进行等点聚焦。程序如下 100v 缓慢 1h 200v 缓慢 1h 500v 缓慢 1h 1000v 缓慢 1h 10000v 线性 4h 10000v 快速 100000v.H 500 v 快速 24h 聚焦后用的gel胶为10%的，先用50v，再用200v跑完。 结果如下图，分别为1，2，3，左边是正极端。请大家帮忙分析下原因，不甚感激。 ps：我已经做了几个月了，结果总这样差不多烂，别人论文里面也是这样，但是图谱上蛋白点多很多，也分散的均匀，实在想不明白。    |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 电泳、bio-rad 电转化仪及操作 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有62人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 武汉哪里有做双向电泳和质谱分析？
已经有5人回复
- 请教大家关于双向电泳的问题~
已经有4人回复
- 请大家帮忙分析下我的SDS-PAGE蛋白检测胶啊
已经有26人回复
- 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论
已经有14人回复
- 双向电泳图求助
已经有4人回复
- 双向电泳，刚提出来的总蛋白，在裂解液里可以4度放多久啊？
已经有12人回复
- 关于SDS-PAGE与双向电泳的请教
已经有6人回复
- 双向电泳 蛋白纯化
已经有6人回复
- 大家帮忙分析一下PCR电泳图
已经有14人回复
- 【求助/交流】大家帮忙看下我的PCR电泳图，急！做了7.8次还是这样。
已经有15人回复
- 【求助/交流】求荧光差异双向电泳 的分析软件 说明书
已经有3人回复
3楼2011-12-22 10:03:59
2楼2011-12-22 06:44:19
Rubisco580
金虫 (小有名气)
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 997.7
- 红花: 7
- 帖子: 264
- 在线: 48.5小时
- 虫号: 553802
- 注册: 2008-05-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2011-12-22 16:35:41
5楼2011-12-30 22:27:46
