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hxy2011

金虫 (小有名气)


[交流] 核糖体结合位点与ATG起始密码子的距离问题

我最近目的基因连接一个表达载体,在细菌中表达,ATG起始位点离载体核糖体结合位点20bp左右,会不会影响我的目的基因的表达呢?
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longage.gene

银虫 (小有名气)


★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-14 14:34:36
引用回帖:
8楼: Originally posted by hxy2011 at 2011-12-13 19:21:18:
非常感谢。原始质粒的RBS就是AGGAA,我在复制序列的时候出现了问题。第二个基因是里RBS比较远的酶切位点连接的。那像这种情况怎么解决呢?是不是要在设计引物时自己加RBS?

总之一个原则,atg前要RBS,spacer 5~10为佳,远些问题不大,短了问题很大。至于什么方法加RBS,具体问题具体分析,因为有很多方法。 你的第一个基因RBS要再近点效率会提升不少。
9楼2011-12-13 22:12:57
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panda73

金虫 (小有名气)


★ ★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-13 18:58:21
一般RBS距ATG的距离在3-10个碱基,你的什么载体,会呈现这种情况?
2楼2011-12-12 21:54:13
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hxy2011

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-12 21:54:13:
一般RBS距ATG的距离在3-10个碱基,你的什么载体,会呈现这种情况?

我们实验室自己构建的一个载体,那么怎么解决这个问题呢,是不是自己在设计引物是要自己加上啊
3楼2011-12-12 22:34:06
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longage.gene

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): Good! 2011-12-13 18:58:37
你贴上你的atg开始上游30个左右碱基序列,我帮你看看。一般来说spacer过长翻译变弱,但不一定,看过有的论文报道长到40以上效果更好,但那是特例。你认为你的spacer有20多,有些同学不会看rbs,也有可能在atg上游有类似rbs序列也能用。

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4楼2011-12-13 07:40:07
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