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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 核糖体结合位点与ATG起始密码子的距离问题
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hxy2011

金虫 (小有名气)

[交流] 核糖体结合位点与ATG起始密码子的距离问题

我最近目的基因连接一个表达载体，在细菌中表达，ATG起始位点离载体核糖体结合位点20bp左右，会不会影响我的目的基因的表达呢？
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1楼 2011-12-12 21:42:13
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longage.gene

银虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-14 14:34:36
引用回帖:
8楼: Originally posted by hxy2011 at 2011-12-13 19:21:18:
非常感谢。原始质粒的RBS就是AGGAA，我在复制序列的时候出现了问题。第二个基因是里RBS比较远的酶切位点连接的。那像这种情况怎么解决呢？是不是要在设计引物时自己加RBS？

总之一个原则，atg前要RBS，spacer 5~10为佳，远些问题不大，短了问题很大。至于什么方法加RBS，具体问题具体分析，因为有很多方法。 你的第一个基因RBS要再近点效率会提升不少。
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9楼2011-12-13 22:12:57
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panda73

金虫 (小有名气)
★ ★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-13 18:58:21
一般RBS距ATG的距离在3-10个碱基，你的什么载体，会呈现这种情况？
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2楼2011-12-12 21:54:13
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hxy2011

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-12 21:54:13:
一般RBS距ATG的距离在3-10个碱基，你的什么载体，会呈现这种情况？

我们实验室自己构建的一个载体，那么怎么解决这个问题呢，是不是自己在设计引物是要自己加上啊
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3楼2011-12-12 22:34:06
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longage.gene

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
hxy2011(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-13 18:58:37
你贴上你的atg开始上游30个左右碱基序列，我帮你看看。一般来说spacer过长翻译变弱，但不一定，看过有的论文报道长到40以上效果更好，但那是特例。你认为你的spacer有20多，有些同学不会看rbs，也有可能在atg上游有类似rbs序列也能用。
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胡武佳
4楼2011-12-13 07:40:07
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