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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物有两个起始密码子
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林默泪

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物有两个起始密码子

请教，我在设计一个引物，需要用到Nde1和BamH1这两个酶切位点，但是NdeI酶切位点（CATATG）本身就带了一个起始密码子，之后紧接着目的基因的编码区也是ATG，这个对实验有没有影响，我的实验是关于克隆表达酶的。
上游引物设计如下：GGGAATTCCATATG ATGGAGCAGTTATCTCTGGAG
前面时保护碱基和识别位点，后面是目的基因。
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1楼 2013-09-23 14:10:15
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-24 21:30:26
对酶的活性应该没有太大影响，就是第一个Met会被切掉，还剩一个Met是你的第一个氨基酸
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-09-23 15:55:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-28 02:17:50
如果你还没有设计的话，应该把其中一个ATG去掉，这样和原来蛋白一致了，如果引物都到了，就算了
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2013-09-23 15:56:56
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-24 21:30:37
本帖内容被屏蔽
4楼2013-09-24 15:23:53
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林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-23 15:55:28
对酶的活性应该没有太大影响，就是第一个Met会被切掉，还剩一个Met是你的第一个氨基酸

非常感谢~
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5楼2013-10-09 14:53:38
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林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-23 15:56:56
如果你还没有设计的话，应该把其中一个ATG去掉，这样和原来蛋白一致了，如果引物都到了，就算了

很感谢，当时思考来很久，把引物缩短后，就发现少一个ATG也很不错，就删掉了。谢谢~
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6楼2013-10-09 14:56:56
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林默泪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bolysu at 2013-09-24 15:23:53
酶活可能没影响，可能对表达有较大影响

还没有表达，但是已经去掉一个ATG了，谢谢~
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7楼2013-10-09 14:58:50
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江户川飞儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 林默泪 at 2013-10-09 14:58:50
还没有表达，但是已经去掉一个ATG了，谢谢~...

楼主表达了吗 我也在纠结要不要去掉
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8楼2016-03-24 21:30:01
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