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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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林默泪

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物有两个起始密码子

请教,我在设计一个引物,需要用到Nde1和BamH1这两个酶切位点,但是NdeI酶切位点(CATATG)本身就带了一个起始密码子,之后紧接着目的基因的编码区也是ATG,这个对实验有没有影响,我的实验是关于克隆表达酶的。
上游引物设计如下:GGGAATTCCATATG ATGGAGCAGTTATCTCTGGAG
前面时保护碱基和识别位点,后面是目的基因。
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-24 21:30:26
对酶的活性应该没有太大影响,就是第一个Met会被切掉,还剩一个Met是你的第一个氨基酸
行至水穷处,坐看云起时
2楼2013-09-23 15:55:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 02:17:50
如果你还没有设计的话,应该把其中一个ATG去掉,这样和原来蛋白一致了,如果引物都到了,就算了
行至水穷处,坐看云起时
3楼2013-09-23 15:56:56
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bolysu

禁虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-24 21:30:37
本帖内容被屏蔽

4楼2013-09-24 15:23:53
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林默泪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-23 15:55:28
对酶的活性应该没有太大影响,就是第一个Met会被切掉,还剩一个Met是你的第一个氨基酸

非常感谢~
5楼2013-10-09 14:53:38
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林默泪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-23 15:56:56
如果你还没有设计的话,应该把其中一个ATG去掉,这样和原来蛋白一致了,如果引物都到了,就算了

很感谢,当时思考来很久,把引物缩短后,就发现少一个ATG也很不错,就删掉了。谢谢~
6楼2013-10-09 14:56:56
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林默泪

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bolysu at 2013-09-24 15:23:53
酶活可能没影响,可能对表达有较大影响

还没有表达,但是已经去掉一个ATG了,谢谢~
7楼2013-10-09 14:58:50
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江户川飞儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 林默泪 at 2013-10-09 14:58:50
还没有表达,但是已经去掉一个ATG了,谢谢~...

楼主表达了吗 我也在纠结要不要去掉
8楼2016-03-24 21:30:01
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