24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1608  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] Sac II,EcoR I,Ssp I三酶切问题

一环形质粒,红色为我的目的片段,要获得这个目的片段,设置了3个酶切位点(如果双酶切的话,目的基因和T载体酶切后电泳无法分开)
但是目前3个酶各自酶切均可以,但是3酶切或者任何两个酶双酶切均失败
原本计划为:
首先用Sac II, Ssp I双酶切得到2100和3400bp片段,预想获得3400bp片段后,胶回收再用 EcoR I 单酶切获得600和2800bp的目的片段,但是首先双酶切就没有成功
Sac II, Ssp I双酶切体系为 :
酶各1 T缓冲液 2 BSA 2 质粒 0.6ug 加水到20  (TAKARA的)

如果说单酶切一次一次切的话,胶回收的浓度不够下次及下下次酶切浓度,是否有好的浓缩DNA的方法?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:01:13
tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:18:51
为什么ECR和Sac双酶切会没切开呢?不能啊 ?确定你的酶没有污染?质粒提的够干净?缓冲体系也没问题吧?
如果我成功了,那么我比别人幸运;如果我失败了,那么我还不够努力!
7楼2011-11-28 15:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:14
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?
2楼2011-11-28 13:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:20
为什么不PCR这个基因
hold住
3楼2011-11-28 13:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-11-28 13:32:56:
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?

takara 没有buffer4吧,是一点都没有切开

单酶切都可以完全切开
就是放在一起切不开
4楼2011-11-28 15:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见