24小时热门版块排行榜    

查看: 1822  |  回复: 10

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] Sac II,EcoR I,Ssp I三酶切问题

一环形质粒,红色为我的目的片段,要获得这个目的片段,设置了3个酶切位点(如果双酶切的话,目的基因和T载体酶切后电泳无法分开)
但是目前3个酶各自酶切均可以,但是3酶切或者任何两个酶双酶切均失败
原本计划为:
首先用Sac II, Ssp I双酶切得到2100和3400bp片段,预想获得3400bp片段后,胶回收再用 EcoR I 单酶切获得600和2800bp的目的片段,但是首先双酶切就没有成功
Sac II, Ssp I双酶切体系为 :
酶各1 T缓冲液 2 BSA 2 质粒 0.6ug 加水到20  (TAKARA的)

如果说单酶切一次一次切的话,胶回收的浓度不够下次及下下次酶切浓度,是否有好的浓缩DNA的方法?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:14
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?
2楼2011-11-28 13:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:20
为什么不PCR这个基因
hold住
3楼2011-11-28 13:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-11-28 13:32:56:
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?

takara 没有buffer4吧,是一点都没有切开

单酶切都可以完全切开
就是放在一起切不开
4楼2011-11-28 15:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-11-28 13:45:20:
为什么不PCR这个基因

由于手里没有高保真的酶,所以想着就直接用质粒上连好的基因
若是PCR的话,就是Sac II,EcoR I的双酶切,我也试过了,也没有成功
5楼2011-11-28 15:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:01:06
直接告诉你,换个品牌试试
6楼2011-11-28 15:42:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:01:13
tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:18:51
为什么ECR和Sac双酶切会没切开呢?不能啊 ?确定你的酶没有污染?质粒提的够干净?缓冲体系也没问题吧?
如果我成功了,那么我比别人幸运;如果我失败了,那么我还不够努力!
7楼2011-11-28 15:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yjingmo at 2011-11-28 15:50:07:
为什么ECR和Sac双酶切会没切开呢?不能啊 ?确定你的酶没有污染?质粒提的够干净?缓冲体系也没问题吧?

为什么会这么问呢?是这两个酶很好切吗?
您有已经用过的体系吗?
8楼2011-11-28 16:00:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 16:18:43
挺好切的啊,你先确保自己的东西都没问题
如果我成功了,那么我比别人幸运;如果我失败了,那么我还不够努力!
9楼2011-11-28 16:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yjingmo at 2011-11-28 16:07:54:
挺好切的啊,你先确保自己的东西都没问题

质粒量和纯度都够,您有体系可以让我借鉴一下吗?
10楼2011-11-28 16:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tongxinkxy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +5 小材化本科 2026-03-18 5/250 2026-03-18 21:53 by 无懈可击111
[考研] 0703化学调剂 +4 pupcoco 2026-03-17 7/350 2026-03-18 12:14 by djl2006
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 材料与化工求调剂 +6 为学666 2026-03-16 6/300 2026-03-17 20:15 by peike
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么! 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。,。,。,。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见