24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1876  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[求助] Sac II,EcoR I,Ssp I三酶切问题

一环形质粒,红色为我的目的片段,要获得这个目的片段,设置了3个酶切位点(如果双酶切的话,目的基因和T载体酶切后电泳无法分开)
但是目前3个酶各自酶切均可以,但是3酶切或者任何两个酶双酶切均失败
原本计划为:
首先用Sac II, Ssp I双酶切得到2100和3400bp片段,预想获得3400bp片段后,胶回收再用 EcoR I 单酶切获得600和2800bp的目的片段,但是首先双酶切就没有成功
Sac II, Ssp I双酶切体系为 :
酶各1 T缓冲液 2 BSA 2 质粒 0.6ug 加水到20  (TAKARA的)

如果说单酶切一次一次切的话,胶回收的浓度不够下次及下下次酶切浓度,是否有好的浓缩DNA的方法?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:20
为什么不PCR这个基因
hold住
3楼2011-11-28 13:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

tongxinkxy(金币+3): 2011-11-28 15:28:14
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?
2楼2011-11-28 13:32:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-11-28 13:32:56:
话说这三种都能用Buffer4酶切的,不用一次切一个回收,换个公司的酶试试看吧。
另外,没有切成功是没切开还是没切完全啊?

takara 没有buffer4吧,是一点都没有切开

单酶切都可以完全切开
就是放在一起切不开
4楼2011-11-28 15:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-11-28 13:45:20:
为什么不PCR这个基因

由于手里没有高保真的酶,所以想着就直接用质粒上连好的基因
若是PCR的话,就是Sac II,EcoR I的双酶切,我也试过了,也没有成功
5楼2011-11-28 15:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工300求调剂 +35 肖开文 2026-04-09 38/1900 2026-04-10 22:59 by Ftglcn90
[硕博家园] 0856材料化工求调剂,一志愿211,初试成绩349 +5 江淮北月 2026-04-05 5/250 2026-04-10 16:26 by 高维春
[考研] 0854求调剂 +5 assdll 2026-04-05 5/250 2026-04-10 15:32 by 高维春
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 266求调剂,一志愿哈工程电子信息,本科获多项国奖和省奖 +4 lumine1 2026-04-06 4/200 2026-04-09 17:38 by vgtyfty
[考研] 322求调剂,08工科 +3 今天是个小号 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:53 by wp06
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 生物医药调剂|SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +7 晚风不晚 2026-04-04 7/350 2026-04-06 14:06 by houyaoxu
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 341求调剂 +3 学无止境,冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
信息提示
请填处理意见