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有关蛋白表达的问题
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| 我的目的基因片段只有200bp左右，现在连接到Pcdf-dute和pet-32a，每个都转到BL-21和Rosste中，诱导过后，sds-page检测，可是却不表达，诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度，IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm，培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基，都没有表达，现在郁闷死了，无计可施了，各位大侠帮帮忙。 |
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2楼2011-11-20 21:16:06
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
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3楼2011-11-20 21:32:12
4楼2011-11-20 23:12:00
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zibeisha(金币+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金币+5): 热心的认真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金币+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
zibeisha(金币+3): 2011-11-21 08:41:06
wanhscn(金币+5): 热心的认真的回答！ 2011-11-21 09:01:35
西瓜(金币+2, MolEPI+1): Good！ 2011-11-22 18:09:41
| 蛋白原核表达本来就是个难题 你在这就寥寥几句 谁也帮不上忙 回话的都是只懂一二的 蛋白原核表达 单从表不表达上来说 主要要注意 蛋白的性质 这个是最主要的 有的蛋白是疏水性极强的 有的蛋白是毒性的 有的蛋白等等 如果相关载体 菌株 都试过了 那只能放弃这个系统了 温度 诱导浓度什么的 那只是针对表达质量而言 你现在都没表达出来 所以先确定到底有没有表达 确定载体构建是否百分百正确 然后确定蛋白真的是没表达 还是你没检测到 因为从KB数上看 你的蛋白很小 所以注意系统 可以用western检测一下 如果有表达 只是量小 那么好 再继续这个问题 |
5楼2011-11-21 02:42:51
6楼2011-11-21 08:38:28
xiaoshidemei
新虫 (正式写手)
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7楼2011-11-21 09:58:37
gjs713
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8楼2011-11-21 10:22:11
冰泉cathy
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9楼2011-11-21 12:48:10
【答案】应助回帖
★
西瓜(金币+1): 辛苦 2011-11-22 18:10:20
西瓜(金币+1): 辛苦 2011-11-22 18:10:20
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好吧 得早说嘛 膜蛋白 膜蛋白表达 呵呵 看运气了 不能说太多了 http://wolfson.huji.ac.il/wolfson.html 上这学习一下 实在不行就只能另换系统了 酵母的 体外的 等等 |
10楼2011-11-21 15:17:58
