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zibeisha

木虫 (著名写手)

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[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右，现在连接到Pcdf-dute和pet-32a，每个都转到BL-21和Rosste中，诱导过后，sds-page检测，可是却不表达，诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度，IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm，培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基，都没有表达，现在郁闷死了，无计可施了，各位大侠帮帮忙。

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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。

1楼 2011-11-20 20:27:24

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zibeisha

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 凡子1985 at 2011-11-21 02:42:51:
蛋白原核表达本来就是个难题你在这就寥寥几句谁也帮不上忙回话的都是只懂一二的蛋白原核表达单从表不表达上来说主要要注意蛋白的性质这个是最主要的有的蛋白是疏水性极强的有的蛋白是毒性的有的蛋白等 ...

目的片段是跨膜蛋白上具有免疫原性的一段，表达重组蛋白是为了制备抗体，做免疫组化和western。重组载体后单双酶切验证过，切下来的目的片段大小是对的，载体应该是成功的。