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zibeisha

木虫 (著名写手)

[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右,现在连接到Pcdf-dute和pet-32a,每个都转到BL-21和Rosste中,诱导过后,sds-page检测,可是却不表达,诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度,IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm,培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基,都没有表达,现在郁闷死了,无计可施了,各位大侠帮帮忙。
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有时我们无奈,有时我们迷茫,可是不管怎样,只要我们积极生活,命运就不会亏待我们。
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xiaoshidemei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good!鼓励分享经验! 2011-11-21 11:08:39
zibeisha(金币+2): 目的片段比较小,不过加上融合蛋白的话大概有29kd了,也不算小了 2011-11-21 16:34:42
蛋白表达原因很多,温度你从25到30都试一下,一般27或者28度效果较好,IPTG一般在0.5mm左右效果比较好,最好从0.1到1.0mm都试一下,你的蛋白太小了跑胶也容易出问题,所以多摸索就知道原因了,做蛋白就是麻烦,要有耐心
7楼2011-11-21 09:58:37
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zibeisha

木虫 (著名写手)

自己先顶一下,希望懂行的人看到帮帮忙!
有时我们无奈,有时我们迷茫,可是不管怎样,只要我们积极生活,命运就不会亏待我们。
2楼2011-11-20 21:16:06
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


zibeisha(金币+1): 这个载体没有试过。 2011-11-21 08:37:25
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-22 18:08:10
转速试过吗?不知道楼主实验室用过PGEX载体吗?
jiayoubashaonian
3楼2011-11-20 21:32:12
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llglo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zibeisha(金币+1): 2011-11-21 08:40:57
西瓜(金币-3): 广告贴 2011-11-21 20:02:03
西瓜:编辑内容 2011-11-21 20:02
------------广告贴-------------

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-21 at 20:02 ]
4楼2011-11-20 23:12:00
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