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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关蛋白表达的问题
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zibeisha

木虫 (著名写手)

[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右，现在连接到Pcdf-dute和pet-32a，每个都转到BL-21和Rosste中，诱导过后，sds-page检测，可是却不表达，诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度，IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm，培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基，都没有表达，现在郁闷死了，无计可施了，各位大侠帮帮忙。
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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。
1楼 2011-11-20 20:27:24
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xiaoshidemei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): Good！鼓励分享经验！ 2011-11-21 11:08:39
zibeisha(金币+2): 目的片段比较小，不过加上融合蛋白的话大概有29kd了，也不算小了 2011-11-21 16:34:42
蛋白表达原因很多，温度你从25到30都试一下，一般27或者28度效果较好，IPTG一般在0.5mm左右效果比较好，最好从0.1到1.0mm都试一下，你的蛋白太小了跑胶也容易出问题，所以多摸索就知道原因了，做蛋白就是麻烦，要有耐心
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7楼2011-11-21 09:58:37
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查看全部 26 个回答

zibeisha

木虫 (著名写手)
自己先顶一下，希望懂行的人看到帮帮忙！
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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。
2楼2011-11-20 21:16:06
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zibeisha(金币+1): 这个载体没有试过。 2011-11-21 08:37:25
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-22 18:08:10
转速试过吗？不知道楼主实验室用过PGEX载体吗？
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-20 21:32:12
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llglo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zibeisha(金币+1): 2011-11-21 08:40:57
西瓜(金币-3): 广告贴 2011-11-21 20:02:03
西瓜:编辑内容 2011-11-21 20:02
------------广告贴-------------

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-21 at 20:02 ]
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4楼2011-11-20 23:12:00
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查看全部 26 个回答
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