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zhangqian082新虫 (小有名气)
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[求助]
PCR没有条带，求高人指点！！！！！！！！！
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最近在扩增两个基因，含有酶切位点和保护碱基，片段长度和引物分别如下： 1）目的基因长度1401bp 上游引物：atg ctc gag gac acc aaa cat ttc ctg ccg ctc gat 下游引物：atg aag ctt atg ggc ccg cag gcc taa gtc att tg 2）目的基因长度1600bp 上游引物：atg ctc gag tct tgg gcc gct cgc ccg ccc tt 下游引物：atg aag ctt ggt ctg agc tca ggc cag ttg 使用的是TAKARA 的Mix 酶，使用20微升的体系如下： Premix:10微升 CDNA：2微升 Primer1:0.4微升 Primer2:0.4微升 水：7.2微升 模板是RT反转录的来的CDNA。 看引物的GC含量较高，就设了温度梯度，60-70°，但是始终都没有条带。 现在要每天看老板脸色了，呜呜，请高人指点下，多谢！ |
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blackrose8089
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zhangqian082
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