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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于琼脂糖凝胶电泳对标记探针验证问题
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逍遥蘑菇

新虫 (小有名气)

[求助] 关于琼脂糖凝胶电泳对标记探针验证问题

各位大虾，我想请教一个问题
我的实验中用地高辛标记引物使PCR产物含有地高辛标记，那么我查阅了相关资料是说可以用琼脂糖凝胶电泳去验证标记是否成功。标记DNA比未标记DNA的电泳条带会延迟。那么我的DNA序列是78bp 2%的琼脂糖进行电泳，结果也证明标记DNA确实跑的慢。有文献说，标记上的比未标记上的分子量大，因此会跑的慢。

那么现在我有一个问题，DIG-11-dUTP分子量是1132.7，大约是3个碱基的量，那么我的理解是，标记与为标记的实际上只相差3个碱基，琼脂糖电泳是怎么做到鉴别的呢？但我的实验结果确实又是如此，是不是我理解的有问题呢？不太明白为什么。

希望大家能够帮助我解答~ 非常感谢哇
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1楼 2011-10-28 20:21:11
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zhaozg_77

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

最近也在做这方面实验，不过我也是新手，看到这个帖子，我想会不会是这个原因，DIG标记的dUTP代替部分dTTP掺入待标探针中并非是取代一个而是多个，这样分子量就会明显增大。。。个人意见，仅供参考
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5楼2012-07-26 22:18:02
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逍遥蘑菇

新虫 (小有名气)
为虾米木有人回应我嘞
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2楼2011-10-29 23:51:08
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逍遥蘑菇

新虫 (小有名气)
wanhscn: 可以帮你提升主题,加大关注! 2011-10-31 12:26:44
弱弱的再顶一下~希望有人能回答我~
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3楼2011-10-31 08:46:17
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gingerqq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

逍遥蘑菇(金币+10): 非常感谢~显色的方法我验证过~只是电泳结果我不知道如何解释~还是给你10个金币~谢谢 2011-11-02 21:54:38
可以用另外的方法检测你的探针是否已被dig标记，如果你想检测这个得话，不一定非用电泳的方法 探针再PVDF膜上与anti杂交 显色 就可以完成
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4楼2011-11-02 16:58:01
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