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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

[求助] 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液?

一种小肽,是用毕赤酵母表达得到的,pI为11,一般呈阳离子状态,用离子交换法纯化,理论上一般用阳离子交换法分离纯化,但是该选用什么样的缓冲液呢(主要是pH该选多少)?还有一种说法是用阴离子交换法纯化,以除去杂蛋白,进而使目的蛋白得到纯化(这种方法在理论上是可行的,但貌似费时,费力)。
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爱拼才会赢
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流! 2011-10-28 19:26:58
用阳离子交换柱,可以考虑pH6.0-7.0的缓冲液,因为大部分蛋白质的等电点在这附近,带电荷少,这样容易穿透除去其他杂蛋白。而你的目的蛋白PI在11,挂柱应该比较牢固。但是有个问题需要注意,PH离你的目标蛋白PI太远,有可能导致挂柱后难以洗脱。
3楼2011-10-28 12:21:32
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jacobgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流! 2011-10-28 19:26:51
可以用CEC,pH需筛选优化了,主要同时考试目标纯度和回收率;
也可以用AEC,主要以流穿模式做。
路遥远,我们一起走
2楼2011-10-28 12:02:00
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2011-10-28 19:27:04
理论上来说,所用缓冲液的PH和你的目的蛋白的等电点差一个PH单位,从你的目的蛋白来看,PH挺高的,考虑你的填料能不能适应。
4楼2011-10-28 13:03:17
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