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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液？
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

[求助] 用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液？

一种小肽，是用毕赤酵母表达得到的，pI为11，一般呈阳离子状态，用离子交换法纯化，理论上一般用阳离子交换法分离纯化，但是该选用什么样的缓冲液呢（主要是pH该选多少）？还有一种说法是用阴离子交换法纯化，以除去杂蛋白，进而使目的蛋白得到纯化（这种方法在理论上是可行的，但貌似费时，费力）。
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爱拼才会赢
1楼 2011-10-28 09:36:53
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jacobgo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:26:51
可以用CEC，pH需筛选优化了，主要同时考试目标纯度和回收率；
也可以用AEC，主要以流穿模式做。
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路遥远，我们一起走
2楼2011-10-28 12:02:00
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:26:58
用阳离子交换柱，可以考虑pH6.0-7.0的缓冲液，因为大部分蛋白质的等电点在这附近，带电荷少，这样容易穿透除去其他杂蛋白。而你的目的蛋白PI在11，挂柱应该比较牢固。但是有个问题需要注意，PH离你的目标蛋白PI太远，有可能导致挂柱后难以洗脱。
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3楼2011-10-28 12:21:32
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:27:04
理论上来说，所用缓冲液的PH和你的目的蛋白的等电点差一个PH单位，从你的目的蛋白来看，PH挺高的，考虑你的填料能不能适应。
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4楼2011-10-28 13:03:17
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