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塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 阳性菌破壁问题求指导

0.3g菌体，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000转离心1-2min还能得到菌体沉淀，延长超声时间也白搭，求指点。
谢谢

[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]
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1楼 2011-10-25 14:54:27
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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塞外雨(金币+1): 谢谢，还有更好的方法吗？ 2011-10-26 10:41:43
wanhscn(金币+2): 鼓励回答更多问题，有奖励! 2011-10-26 11:13:49
引用回帖:
1楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-25 07:54:27:
0.3g菌体，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000转离心1-2min还能得到菌体沉淀，延长超声时间也白搭，求指点。
谢谢
[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]

酶法裂解呢？试试溶菌酶吧
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2楼2011-10-26 10:23:05
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塞外雨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 蓝月望宁 at 2011-10-26 10:23:05:
酶法裂解呢？试试溶菌酶吧

谢谢，溶菌酶对所有菌体破壁都有作用吗？
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3楼2011-10-26 10:43:21
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海王之心2751

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你不说清楚 谁帮你解答 ，目的产物都没说那些试剂或物理方面会被破坏 。如果无所谓的话，可用酸，丙酮，液氮，高速细胞破碎器。。。。。。。。。。
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4楼2011-10-26 19:49:29
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
只有稀释了，多加点缓冲液再超声吧。
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5楼2011-10-27 01:06:03
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
塞外雨(金币+1): 2011-10-27 08:36:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-26 03:43:21:
谢谢，溶菌酶对所有菌体破壁都有作用吗？

溶菌酶只对阳性菌有作用，主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。
对真菌来说就可用蜗牛酶。主要看菌体的细胞壁性质。
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6楼2011-10-27 07:47:12
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eileen8519

金虫 (小有名气)
★
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塞外雨(金币+1): 2011-10-27 08:36:37
菌体少的话，我们也一般用超声破碎。400W,工作5S，间隔10S，20次一个循环，循环超声3至4次，细胞一般还是可以破碎完的。最后12000RPM，离心10min。
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7楼2011-10-27 08:27:53
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塞外雨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 海王之心2751 at 2011-10-26 19:49:29:
你不说清楚 谁帮你解答 ，目的产物都没说那些试剂或物理方面会被破坏 。如果无所谓的话，可用酸，丙酮，液氮，高速细胞破碎器。。。。。。。。。。

哦我的目的就是将其破壁后，将菌体的全蛋白提出来，不是表达的外源蛋白。
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8楼2011-10-27 08:36:20
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sl35537417

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-25 14:54:27:
0.3g菌体，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000转离心1-2min还能得到菌体沉淀，延长超声时间也白搭，求指点。
谢谢
[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]

可以试一下 压力破碎
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9楼2011-10-27 09:09:40
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jiegou2006

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
菌体超声破碎、高速离心后肯定都有沉淀的，沉淀可能是完整细胞，也可能是破碎后的细胞碎片、变性蛋白、多糖等物质，因此你是怎么判断得到的沉淀就是没有破碎的菌体呢？先把这个问题搞清楚吧。
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10楼2011-10-27 09:18:31
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