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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 两种引物的PCR电泳图,做了多次还是不解

下面我的PCR电泳图,彩色图第一个是Marker,诚然Marker跑得不好,买来直接用,可是每次都跑不开。
    因为我做的是T-RFLP即末端限制性酶切技术,所以用的是带荧光的引物,选择时我参考的文献人家也选择的这样的,P出的片段大约是1.5KB,左起第2,3个是DNA的PCR,4,5是空白,可是为什么有条带,做了很多次都这样。后面四个是用另一种引物做的,不带荧光,P出的片段是100多bp,靠右边两个是空白。
   不知道有没有人也是做T-RFLP的,能否传授些宝贵经验,后面就是要切割胶片进行纯化,然后对PCR产物进行酶切,可是PCR这是做不好,下面一直无法进行下去。
  附上之前做过的黑白图,用的是带荧光的引物做的,每次都呈现这样的图,之前我也没观察颜色的不同,一直解不开谜团。这样分析的话是不是跑得比较慢的是我需要的片段呢,如何去除不需要的荧光片段呢?







[ Last edited by 树宝宝zyx on 2011-10-16 at 12:30 ]
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科研真辛苦!
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hdengmin

木虫 (著名写手)

没做过T-RFLP
2楼2011-10-16 12:49:29
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