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孙启亮金虫 (著名写手)
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[交流]
普通PCR的引物能用于荧光定量PCR吗？已有25人参与
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| 我需要做某个基因的荧光定量PCR，但是在设计引物的时候总出现问题，于是想通过NCBI的uniSTS搜索电子克隆出来的引物，但这些引物都是普通PCR的引物，所以我想问这些引物可用与做real-time PCR吗？ |
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 【分子生物】EPI帖 | 核酸与基因生物学 |
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小丹木木(MolEPI+1): 2012-02-10 13:42:14
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小丹木木(MolEPI+1): 2012-02-10 13:42:14
| uniSTS的引物,我搜索过,有些论文也用它来做SYBR荧光定量PCR的,不过,有的PCR产物比较长,要有所选择,如果比较懒,找到引物,直接GOOGLE,看看有没有人用过.如果想自己设计,NCBI的引物设计软件也可以用的，我习惯选择跨内含子的引物，如果你确信RNA提取后DNase降解DNA很彻底，也可不用跨内含子引物。新手或者懒的话，请DNA合成公司代设计引物就好了，说明是做荧光定量PCR就行，有的公司免费帮设计，他们经验也很多，拿到引物，自己再分析检查一下，没问题就请他们帮合成好了。 |
17楼2012-02-10 05:34:47
amilie030312
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wanhscn(MolEPI+1): 热心！感谢专业的解答！授予专家指数！ 2012-02-12 09:32:35
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wanhscn(MolEPI+1): 热心！感谢专业的解答！授予专家指数！ 2012-02-12 09:32:35
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SYBR染料特性是只要有DNA双链存在就会契合到DNA的双链XX小沟里发光，（具体叫啥沟不记得了），TaqMan探针是上游引物加下游引物加一段特异的TaqMan探针识别方式，TaqMan探针其实也是一段序列，在上游引物后方与模板互补的一个区段，在该探针的最前和最后各有一个荧光激发基团和一个荧光淬灭基团，当扩增反应没发生时探针结合在模板上，激发基团和淬灭基团距离近导致荧光激发基团不发光，扩增开始之后，TaqMan探针被剪切开，两基团分离，荧光激发基团发光，定量机器检测到该基团发光，所以你普通PCR的引物不能做TaqMan探针法的定量PCR实验。 不知道我解释明白没有，一般说这个我都是画图说的，在这上面我也不会画图。 |
19楼2012-02-10 10:48:26
39楼2014-04-23 16:51:10
孙启亮
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7楼2012-02-09 14:28:27
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amilie030312
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