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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » western blot 显影结果总是很模糊，看不到条带（内参条带清晰），求分析！
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[求助] western blot 显影结果总是很模糊，看不到条带（内参条带清晰），求分析！

我做了好几次了 显影出来都是这样，我的蛋白上样量是20 ug, 我得目的蛋白的一抗用5%的BSA的TBST溶液以1:200稀释，内参的以1:1000稀释，四度过夜孵育，二抗用TBST以1:2000稀释，室温孵育四小时。
  大家帮我分析一下原因吧！！
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1楼 2011-09-21 09:38:48
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2011加油

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
chunmeiyang(金币+1): 2011-09-26 08:32:10
qinhy(金币+1): 谢谢回帖~ 2011-10-11 20:34:53
chunmeiyang(金币+1): 2011-10-13 08:11:22
一抗液稀释应再大一些，现在背景高了。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
2楼2011-09-24 19:07:28
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wangleimin

木虫 (正式写手)

小有名气

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1): 谢谢回帖~ 2011-10-11 20:35:01
chunmeiyang(金币+1): 2011-10-13 08:11:27
是不是被污染了啊，配胶时的时候，多重复几次就好了
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自信与认真
3楼2011-10-10 19:27:39
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-09-24 19:07:28:
一抗液稀释应再大一些，现在背景高了。

之前说的这句话不对了，如果膜中有条带出现，并伴随背景很高时应该二抗液稀释再大一些或者增加洗膜次数或延长洗膜时间。现在图片那里似乎看不到条带，不大好分析了。加油，预祝下次实验成功！
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
4楼2011-10-11 21:32:25
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