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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE结果条带
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oceanqq

金虫 (小有名气)

[求助] DGGE结果条带

这是我跑的DGGE条带，胶浓度8%，变性剂浓度是45%-60%，65v跑了7h,感觉很多细小条带并不清晰，请各位高手帮忙分析一下，不胜感激
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1楼 2011-08-30 17:15:20
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-31 10:54:56
染色挺黑的，整块胶都感觉黑。
是不是染色的问题比较大？
另外，我觉得，PCR一定要采用比较好的质量高的酶，这样的扩增产物会更好一些。
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2楼2011-08-31 08:53:26
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oceanqq

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiadongliang at 2011-08-31 08:53:26:
染色挺黑的，整块胶都感觉黑。
是不是染色的问题比较大？
另外，我觉得，PCR一定要采用比较好的质量高的酶，这样的扩增产物会更好一些。

染色是终止反应 终止晚了点儿 不知以您经验该如何改进呢  不过一直都染的挺黑  PCR用哪种酶呢  请推荐一下
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3楼2011-08-31 10:54:37
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

oceanqq(金币+20): 2011-08-31 14:41:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by oceanqq at 2011-08-31 10:54:37:
染色是终止反应 终止晚了点儿 不知以您经验该如何改进呢  不过一直都染的挺黑  PCR用哪种酶呢  请推荐一下

染色时间可以稍长，但是显影一定是看到清晰条带后立即终止反应，不要等到条带黑了再终止反应。
酶我一直用takara的 rtaq，感觉还不错。
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oceanqq
4楼2011-08-31 13:52:11
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oceanqq

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiadongliang at 2011-08-31 13:52:11:
染色时间可以稍长，但是显影一定是看到清晰条带后立即终止反应，不要等到条带黑了再终止反应。
酶我一直用takara的 rtaq，感觉还不错。

恩，我下次染色延长到20分钟？我酶倒是也一直用的takara的 rtaq。看样您是高手，应该多向您请教
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5楼2011-08-31 14:48:15
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txzhuwenxiu6285

新虫 (初入文坛)
我的DGGE是80V要走10个小时呢，你们的这个条件跑胶时间是不是少了点啊？
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6楼2011-08-31 15:11:36
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wangi9915

新虫 (初入文坛)
我们都用60V的跑16个小时以上~
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7楼2011-08-31 21:25:45
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oceanqq

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by txzhuwenxiu6285 at 2011-08-31 15:11:36:
我的DGGE是80V要走10个小时呢，你们的这个条件跑胶时间是不是少了点啊？

你好 我昨天试了下跑到时间长 可是条带跑得过于偏下了 不知该如何修正呢
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8楼2011-09-01 15:02:55
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oceanqq

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangi9915 at 2011-08-31 21:25:45:
我们都用60V的跑16个小时以上~

我昨天六十伏跑了十个小时 条带就跑得偏下了 最下面的部分就几乎要跑出去了 是变性剂浓度有问题吗
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9楼2011-09-01 15:05:12
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