24小时热门版块排行榜

木虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆连接问题！

本人最近想把一个用Xho I 和Nde I双酶切获得的基因片段连接到用同样的酶进行酶切完毕的PET28b（+）质粒中，上述两个酶的说明书（宝生物）说这两个酶进行酶切获得的片段需要按照平末端连接条件进行连接，小弟以前没做过克隆，跪求高手给出个连接条件吧，越详细越好，我都失败一周了。。。。

1楼 2011-08-26 21:33:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
yitonghui(金币+2): 2011-08-27 09:06:11
dhd997(金币+3): good 2011-08-27 09:24:12

你的酶切有没有问题？？Xho I 和Nde I有没有共同的酶切缓冲液？？如果这个不合适，酶切成功率会很低，连接也没有效果的。这个你可以发邮件问问宝生物或者是NEB的专业顾问。如果酶切没有问题，之后的连接，转化的操作都很easy的

6楼2011-08-27 08:46:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

金虫 (小有名气)

yitonghui(金币+1): 2011-10-07 21:31:04

刚才又查了一下，Xho I 和Nde I的双酶切buffer是1*Hbuffer

7楼2011-08-27 08:52:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 yitonghui 的主题更新