应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切的片段不见了？
51/1返回列表
查看: 1834  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ybs007

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切的片段不见了？

向大家请教一个问题，我最近在做转化，用的是pET-30a，连的片段为400bp，酶切位点为kpnI和HindIII，但是双酶切后，却没找到400的片段。之后我又分别做了单酶切，对照验证两个酶都有效的切开了质粒，但是就是没有400bp的目的片段，很纠结，很纠结，望各位虫友搭救！！！（PS：我用载体通用引物扩增的时候能扩出来720的片段，说明目的片段应该连上了）
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
平生我自知
1楼 2011-08-26 19:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingbi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 08:04:02
ybs007(金币+1): 2011-09-03 11:33:34
也许这两个酶不太好切，或者其中一管污染。先用第一个酶单切5小时，直接回收后再用第二个酶及其高效buffer 温度切2小时，电泳再看
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-29 21:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-08-26 20:02:29
ybs007(金币+2): 嗯 我的师哥建议我用中提试试 2011-08-27 09:38:09
量少的话确实看不到小片段的，毕竟400片段只有大片段（5K）的十几分之一呀。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-26 19:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

和一

银虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 3Q 2011-08-30 08:03:54
我曾经也出现过这个问题，用的是PET28A，连接的片段是402bp，双酶切后402bp的片段看不见，后来用碱裂解法重提质粒，结果切出来了。分析原因，可能是用小提试剂盒提出的质粒量比较少，连接的片段又小，电泳上显示不出来。碱裂解法提出的质粒量比较大，楼主不妨试试。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-27 11:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 18:46:12
ybs007(金币+1): 2011-09-03 11:33:50
加大酶切反应体系试试看，这样质粒浓度高，切出来小片段浓度也就高了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-30 13:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 18:58 by lXgU0RvNTDC9
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 18:55 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 3/150 2026-08-23 16:30 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 15:30 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭