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ybs007

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切的片段不见了?

向大家请教一个问题,我最近在做转化,用的是pET-30a,连的片段为400bp,酶切位点为kpnI和HindIII,但是双酶切后,却没找到400的片段。之后我又分别做了单酶切,对照验证两个酶都有效的切开了质粒,但是就是没有400bp的目的片段,很纠结,很纠结,望各位虫友搭救!!!(PS:我用载体通用引物扩增的时候能扩出来720的片段,说明目的片段应该连上了)
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平生我自知
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lingbi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 08:04:02
ybs007(金币+1): 2011-09-03 11:33:34
也许这两个酶不太好切,或者其中一管污染。先用第一个酶单切5小时,直接回收后再用第二个酶及其高效buffer 温度切2小时,电泳再看
4楼2011-08-29 21:18:16
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