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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 89.1
散金: 62
帖子: 49
在线: 9.4小时
虫号: 1325909
注册: 2011-06-18
性别: GG
专业: 免疫学研究新技术与新方法

[求助] 转质粒不成功,好几次了,大家给分析一下问题会出在哪里

目前在做质粒构建,问题是,载体酶切,片段酶切之后连接转化涂板总是什么都不长,试过电转,DH4a转,都没有成功,我之前没怎么做过,实在不清楚问题出在哪里,求高手指教

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1楼 2011-08-23 17:03:33

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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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引用回帖:

6楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-23 21:44:05:
很明显主要原因应该是连接的问题了
1：你的载体和基因酶切是否完全，尤其是载体，酶切出来的条带要单一；还有就是载体和基因酶切完全后，要纯化完全，不然很影响后期连接酶的效率的；
2：连接体系的设置，可以根 ...

1.酶切过纯化后我都是跑电泳看过条带的,
2.我还是觉得是我的链接体系有问题,那么请问通用比例是多少呢