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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转质粒不成功,好几次了,大家给分析一下问题会出在哪里

目前在做质粒构建,问题是,载体酶切,片段酶切之后连接转化涂板总是什么都不长,试过电转,DH4a转,都没有成功,我之前没怎么做过,实在不清楚问题出在哪里,求高手指教
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
9楼: Originally posted by 造血干细胞 at 2011-08-24 11:03:44:
一般3~5kb的质粒载体于20微升的连接体系中加0.05-0.1微克,目的基因与载体的摩尔数之比1约3:1(双酶切的情况下)。这种说法对吗

不完全对。。。说的不太准确。。。
你就按我给你说的公式 算算,出来肯定有一个添加量的范围。。。
要不你说说你定量出来的载体和基因是多少?1ul载体和基因分别多少ng?
载体多大?基因多大?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2011-08-24 11:14:30
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 是需要考虑,鼓励交流 2011-08-23 19:11:44
原因可能有很多,感受态细胞是否不行?连接是否成功?
2楼2011-08-23 18:03:04
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 是要认真的 2011-08-23 19:11:55
质粒有没有特殊性,有没有做阳性对照?还是仔细的做好每步工作
3楼2011-08-23 18:06:27
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

实在不行的话,楼主能不能考虑让师兄姐妹代做一下看看!
jiayoubashaonian
4楼2011-08-23 20:42:49
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