应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr加样顺序
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 4265  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

256k

新虫 (正式写手)

[交流] pcr加样顺序 已有2人参与

鄙人用的是：无菌水--buffer---Mg离子---模板--上游引物 - 下游引物--dNTP--Taq酶。
不知道有没有最优的加样顺序？

另外：操作时要在冰上么？为什么呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-19 10:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+1): 预混最好 2011-08-19 15:51:35
西瓜(金币+2): good 2011-08-19 18:41:12
最好最后一步加模板，防止模板污染很重要，其他的顺序一般是先加体积大的，再加体积小的，taq酶倒数第二个加，要是做得组数比较多，可以把体积合并，到加模板的时候再分开。
同时需要做阳性对照和阴性对照，这也是必须的
赞一下(4人) 回复此楼
4楼2011-08-19 15:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-19 12:02:40
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 补上！ 2011-08-19 18:40:52
那就是把除了引物，模板以外的所有一样的东西先混好，然后分装再加模板和引物。或者直接购买PCR MIX.
PCR一般很粗犷的，没什么问题，分开加的话，酶放最后就好了。
在冰上操作是为了冻结酶的活性，防止产生非特性的扩增。当然一般分子生物学操作均最好在冰上操作，比如万一混入什么核酸酶呀什么的，蛋白酶什么的，冰上也没什么活性，一加热就又都失活了。
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2011-08-19 11:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2011-08-19 11:03:18:
那就是把除了引物，模板以外的所有一样的东西先混好，然后分装再加模板和引物。或者直接购买PCR MIX.
PCR一般很粗犷的，没什么问题，分开加的话，酶放最后就好了。
在冰上操作是为了冻结酶的活性，防止产生非特 ...

厉害！精辟！
回复此楼
3楼2011-08-19 11:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-19 15:37:04:
最好最后一步加模板，防止模板污染很重要，其他的顺序一般是先加体积大的，再加体积小的，taq酶倒数第二个加，要是做得组数比较多，可以把体积合并，到加模板的时候再分开。
同时需要做阳性对照和阴性对照，这也 ...

谢谢指教
回复此楼
5楼2011-08-19 15:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +9 一样YWY 2026-04-01 9/450 2026-04-01 22:57 by peike
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 08工科275求调剂，可跨考。 +5 AaAa7420 2026-03-31 5/250 2026-04-01 15:21 by 159357hjz
[考研] 求调剂 +5 零八# 2026-03-27 5/250 2026-04-01 14:40 by yulian1987
[考研] 0710生物学求调剂！ +6 叙述文 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:39 by JourneyLucky
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +12 Koxui 2026-03-28 12/600 2026-03-31 23:17 by wwytracy
[考研] 299求调剂 +8 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 8/400 2026-03-31 18:23 by lizhi8172
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-03-29 6/300 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 085601一志愿西北工业大学初试346 +4 085601初试346 2026-03-30 4/200 2026-03-31 07:47 by jp9609
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +5 小张zxy张 2026-03-26 10/500 2026-03-31 00:29 by jp9609
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 0703化学求调剂 +6 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-30 18:33 by 探123
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭