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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] pcr加样顺序 已有2人参与

鄙人用的是:无菌水--buffer---Mg离子---模板--上游引物 - 下游引物--dNTP--Taq酶。
不知道有没有最优的加样顺序?

另外:操作时要在冰上么?为什么呢?
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主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2011-08-19 11:03:18:
那就是把除了引物,模板以外的所有一样的东西先混好,然后分装再加模板和引物。或者直接购买PCR MIX.
PCR一般很粗犷的,没什么问题,分开加的话,酶放最后就好了。
在冰上操作是为了冻结酶的活性,防止产生非特 ...

厉害!精辟!
3楼2011-08-19 11:12:38
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roomofxw

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-19 12:02:40
西瓜(金币+2, MolEPI+1): 补上! 2011-08-19 18:40:52
那就是把除了引物,模板以外的所有一样的东西先混好,然后分装再加模板和引物。或者直接购买PCR MIX.
PCR一般很粗犷的,没什么问题,分开加的话,酶放最后就好了。
在冰上操作是为了冻结酶的活性,防止产生非特性的扩增。当然一般分子生物学操作均最好在冰上操作,比如万一混入什么核酸酶呀什么的,蛋白酶什么的,冰上也没什么活性,一加热就又都失活了。
2楼2011-08-19 11:03:18
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wzqno

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
1949stone(金币+1): 预混最好 2011-08-19 15:51:35
西瓜(金币+2): good 2011-08-19 18:41:12
最好最后一步加模板,防止模板污染很重要,其他的顺序一般是先加体积大的,再加体积小的,taq酶倒数第二个加,要是做得组数比较多,可以把体积合并,到加模板的时候再分开。
同时需要做阳性对照和阴性对照,这也是必须的
4楼2011-08-19 15:37:04
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主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-19 15:37:04:
最好最后一步加模板,防止模板污染很重要,其他的顺序一般是先加体积大的,再加体积小的,taq酶倒数第二个加,要是做得组数比较多,可以把体积合并,到加模板的时候再分开。
同时需要做阳性对照和阴性对照,这也 ...

谢谢指教
5楼2011-08-19 15:43:09
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